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人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶ELISA試劑盒使用說明書
閱讀：2058 發(fā)布時(shí)間：2011-11-1人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（α-GST）ELISA檢測試劑盒
使用說明書
檢測原理
人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶ELISA試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）,。往預(yù)先包被人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（α-GST）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本,、標(biāo)準(zhǔn)品,、HRP標(biāo)記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并*洗滌,。用底物TMB顯色,，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（α-GST）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度,。
試劑盒組成
| 1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
| 2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 標(biāo)準(zhǔn)品（96U/L） | 0.5ml×1瓶 |
| 3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 1.5ml×1瓶 |
| 4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
| 5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
| 6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個(gè) |
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。
| 48 U/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 24 U/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 12 U/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 6 U/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
| 3 U/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次,，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5,。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。
11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
試劑盒性能
1. 準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,，大于等于0.9900。
2. 靈敏度：zui低檢測濃度小于1.0 ng/mL,。
3. 特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng),。
4. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%,。
5. 貯藏：2-8℃,，避光防潮保存。
6. 有效期：6個(gè)月
免責(zé)聲明
1. 試劑盒僅供研究使用,，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn),，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),，本公司概不負(fù)責(zé),。
2. 嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作,，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān),。
洗板方法
1. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,，在吸水紙上拍干,，如此洗板5次。
2. 自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液350μL,，浸泡1min,，洗板5次。
人α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶ELISA試劑盒注意事項(xiàng)
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),，如標(biāo)本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，做復(fù)孔,。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計(jì)算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準(zhǔn),。
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：；2-8℃,。
2．有效期：6個(gè)月