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ELISA實驗中細胞樣本該如何處理呢?
閱讀：1587 發(fā)布時間：2021-3-17ELISA（酶聯免疫吸附劑測定）是一種快速,、靈敏、準確可靠的一種定量分析方法,，樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用,。 利用ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿）,，組織勻漿,、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織,、尿液,、糞便、肺泡灌洗液,、唾液,、腦脊液、胸腹水,、前列腺液,、精液、陰道分泌物等,，這些樣本收集的時間,、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果。下面就常見ELISA細胞處理方法的整理,，希望對您有所幫助,。
細胞樣本根據目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多,， 如細胞狀態(tài),、 細胞數量(大于 10^6)、ph(約為 7),、培養(yǎng)基鹽離子濃度,、采樣時間等，所以可能存在檢測不出的情況,。
如果目的物是分泌型,，主要在胞外,，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本，如果目的物主要存在于胞內,，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型,。細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單，取細胞培養(yǎng)上清,，1000×g 離心 20 分鐘,，取上清即可檢測。
細胞裂解液：
1）貼壁細胞需要先用胰酶消化,，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集） ,；
2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3次；
3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞,，再反復凍融） ：
⇒ 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞,，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂,；
⇒ 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍,，室溫融解，反復3次,，使細胞溶脹破碎,；
4）將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘，收集上清備用,。
處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程，由于蛋白容易變性,，降解,，故該過程應盡量溫和。樣本處理之后的儲存也非常重要,，尤其注意不要反復凍融,，樣本處理之后可分裝密封保存， 4 度保存應小于 1 周,，-20 度不應超過 1 個月,，-80度不應超過2個月。在標本使用前應緩慢均衡至室溫,，不應加熱使之融解,。樣本的處理是實驗成功的第yi步, ，以上就是關于常見樣本處理方法的一個簡述,，供研究者參考,。