化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
恒遠(yuǎn)為您講解ELISA實驗之空白孔的設(shè)置
閱讀：2543 發(fā)布時間：2021-3-4今天上海恒遠(yuǎn)為大家講解ELISA實驗技巧中的空白孔對照,。
ELISA試劑盒ELISA空白對照有幾種：
1. 空氣空白水空白：一般是用于儀器調(diào)零的,所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值。
2.底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數(shù)偏高,，同樣所有孔數(shù)值減掉該孔數(shù)值（只加底物和終止液）
3. 酶空白：一般在2步法實驗中使用,，主要是看酶是否和板有非特異性結(jié)合的，一般不做這個 ,。
ELISA空白孔一般設(shè)一個,，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標(biāo)準(zhǔn)品設(shè)2個復(fù)孔,，雖然有點浪費,，但為了確保實驗的可靠性，我認(rèn)為還是很有必要的,。ELISA空白孔加什么,？一般兩個做法，看個人習(xí)慣或者說看你們實驗室的習(xí)慣：
1,，什么都不加,，然后那個孔按照操作流程來做,，這個說法的根據(jù)就是空白，也就是什么都沒有,。
2,，加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做,。這個做法的根據(jù)就是只要不含陽性物質(zhì)就算是空白的,，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個孔除了在沒有陽性物質(zhì)上其他的都與其他孔一致。
怎麼控制顯色時間,？
顯色時間要通過預(yù)實驗找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間,，我用過OPD solution，一般incubation for 15min at RT,，測一次然后立即加入stop solution 在測一次,。