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技術(shù)分享:ELISA加樣步驟的常見問題及對應方法
閱讀:1243 發(fā)布時間:2021-2-2ELISA實驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用,,但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大,,如不注意,有可能導致顯色不全,、花板等結(jié)果,。選擇試劑時,應選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑,,嚴格按照試劑說明書進行操作,,操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
ELISA加樣步驟的常見問題:
①:過長(特別是室內(nèi)溫度較高時),;
②:手工操作中,,加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間;
③:加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。.血清或血漿標本分離不好即進行加樣,。
對應解決方法:
①:標本為血清,,將血液先自然存放1-2小時后,再用3000rmp離心15分鐘,;標本為血漿:必須使用含抗凝劑的血液標本收集管,,采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,放置一段時間后,,3000rpm離心15分鐘,;若在幾天內(nèi)檢測,可放在2-8℃冰箱中,,若要貯存,,則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。
②:加樣后及時放入孵箱,。
③:加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干,。
④:如果采用AT或其他全自動加樣,選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。
⑤:標本較多時,,請分批操作。
ELISA試劑盒在實際操作中,,除了選擇優(yōu)良試劑外,,必須嚴格按照操作步驟進行操作,同時作好室內(nèi)質(zhì)控,、室間質(zhì)評,,以嚴謹?shù)墓ぷ髯黠L檢測每一份標本,才能保證檢測質(zhì)量?,F(xiàn)在國內(nèi)已有相當數(shù)量的單位擁有全自動酶標儀,,這對于實現(xiàn)ELISA標準化檢測、提高檢測質(zhì)量起到了重要作用,。