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在ELISA中,，進行各項實驗條件的選擇是很重要的,，其中包括:

1.固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯,、聚苯乙烯,、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板,、試管,、珠粒等。常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,，在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應(yīng)，觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,，據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。

2. 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進行包被后,，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標(biāo)本的OD值,。選擇OD值大而蛋白量少的濃度,。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml,。

3.酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份),。然后再固定其它條件或采取"方陣法"(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度,。

4. 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉,、安全、有明顯地顯色反應(yīng),，而本身無色,。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)注意防護,。有條件者應(yīng)使用不致癌,、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體,。底物作用一段時間后,，應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,，以10-30分鐘為宜,。底物使用液必須新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入,。

進口分裝:

檢測范圍和靈敏度不同,，用量少時，可使用分裝,，前期是它的長久性不是很好,。

試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線best高點OD 值均在2.0±0.2，零孔的OD 值都控制在0.10以下,。

試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)R≥0.98,。

試劑盒重復(fù)性好，板內(nèi),、板間變異系數(shù)均<9 %,。

試劑的組份都多給20%的富余量,，確保完成48/96孔的檢測，避免分次檢測可能造成試劑量不足的情況,。

檢測抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作,，保證實驗結(jié)果的重復(fù)性。

白介素6是一種細(xì)胞因子,已被證實為B細(xì)胞分化因子.它是一種抗體形成系統(tǒng),它的生理特性,如肝細(xì)胞急性蛋白合成的誘導(dǎo)和基于和白介素3協(xié)同作用的生刺激等,也備受關(guān)注. 并且已證實白介素-6與病理學(xué)存在穩(wěn)定的相關(guān)關(guān)系.例如,報道多種疾病的生長因子為白介素-6, 骨髓瘤細(xì)胞能合成白介素-6并表達白介素-6受體.此外, 白介素6在多種炎性疾病和自身免疫疾病發(fā)揮重要的作用. 此試劑盒能高靈敏度的檢測小鼠血清和細(xì)胞基質(zhì)上清的白介素6 原理 此試劑盒運用了兩種特異性抗體,洗板后加入TMB底物液顯色,顯色的強度與小鼠的白介素-6的量成正比. 檢測范圍 10.94的 700 pg/mL 預(yù)期用途,。

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