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細(xì)胞傳代的辦法您做對(duì)了嗎,?
閱讀:1108 發(fā)布時(shí)間:2019-12-6經(jīng)過(guò)自主研發(fā)和吞并重組不斷擴(kuò)展企業(yè)產(chǎn)品線,逐漸發(fā)展為試劑的專業(yè)商和電子商務(wù)集成供應(yīng)商,,成為試劑職業(yè)發(fā)展的者,。開端細(xì)胞傳代前,仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否*,。
一:細(xì)胞與試劑方面:
1.細(xì)胞(單層細(xì)胞,,鏡檢合適)
2.培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液或MEM 培養(yǎng)液或199 等合適細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)
3.滅活小牛血清、慶大霉素溶液(1 萬(wàn)單位)
4.7.5%NaHC03 溶液
5.0.25%胰蛋白酶
6. PBS 洗液,。
二:實(shí)驗(yàn)小用具方面:
1.小方瓶(100m1)
2.克氏瓶
3.膠塞
4.吸管(10ml,、1m1)
5.細(xì)胞吹打管(20 ml)(以上用具需經(jīng)121℃至少15 分鐘高壓滅菌)
6.C02 孵箱
7.超凈臺(tái)
8.倒置顯微鏡
9.4℃、- 20℃冰箱
三:細(xì)胞傳代的操作過(guò)程
1.選擇細(xì)胞:鏡檢細(xì)胞,,選擇成長(zhǎng)狀態(tài)杰出,,細(xì)胞界限明晰,具有立體感,,形態(tài)好無(wú)污染,、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。
2.配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),,加入滅活小牛血清10m1,,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml,。(僅供一般參考),。
3.消化細(xì)胞:先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞外表1-2 次,每次10m1,,棄去洗液,,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,,細(xì)胞瓶平放,,使消化液*覆蓋細(xì)胞外表。
4.至細(xì)胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打渙散細(xì)胞,,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,,再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量,。
5.加塞,,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定),。
6.填寫傳代記載,。