化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
如何解決ELISA檢測試劑盒的“花板”問題
閱讀：1151 發(fā)布時間：2019-10-25ELISA檢測試劑盒吸附性能好,，空白值低，孔底透明度高的固相載體,，適用血清,、血漿、組織勻漿液,、細胞培養(yǎng)上清液,、尿液等等多種標本類型,。“花板”問題是ELISA檢測試劑盒比較常見的一個問題，那么客戶在遇到這類問題時,，該如何處理呢?
在ELISA檢測試劑盒結(jié)果"花板"的這一問題中,，對檢測數(shù)據(jù)造成很大影響，往往會使檢測者做出誤判,，是實驗中必須要注意和避免的,。針對這個問題，我們建議從以下幾點出發(fā)：
一,、標本/試劑/儀器
1.標本：出入境人員的血液標本,。
2.試劑：HBsAg、HCV,、HIV,、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA檢測試劑盒。
3.儀器：腦心機,，洗板機,，酶標儀。
二,、方法,。所有被檢出入境人員的血液標本，按照各個廠家提供的ELISA檢測試劑盒說明書進行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作,。所有試劑均在有效期內(nèi)使用,。
三、結(jié)果,。所使用不同廠家的試劑有時會出現(xiàn)“花板”問題,。
四、分析
在所有標本進行檢測的過程中,，所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態(tài)的情況下,，步驟均按照各種試劑說明書的要求去做，排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結(jié)果的影響外,，ELISA檢測試劑盒內(nèi)的空白,、陰性和陽性對照以及室內(nèi)質(zhì)控值都很正常，只有檢測的血液標本情況異常,。根據(jù)國家和疾控中心報告陽性率的比例不應(yīng)該是很高的情況下,，HBsAg在用Elisa之前都經(jīng)過了快速金標試劑的檢測，陽性標本得到了一定的控制,。因此，原因可能是在標本的處理,，特別是放置時間,、離心速度和離心時間方面的問題,。所以，標本的處理就成為實驗結(jié)果的主要可疑因素,。
為了避免“花板”現(xiàn)象的出現(xiàn),，降低檢測的假陽性率，獲取準確的實驗結(jié)果,，小編建議應(yīng)選擇靈敏度高,、特異性好、穩(wěn)定性好,、批間差小,、操作方便省時的ELISA檢測試劑盒。
另外,，小編再介紹下ELISA檢測試劑盒血清標本的保存建議：
1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,，一則細菌的生長，其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產(chǎn)生分解作用;二則一些細菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應(yīng)酶作標記的測定方法產(chǎn)生非特異性干擾,。
2.血清標本如是以無菌操作分離,，則可以在2～8℃下保存一周，ELISA如為有菌操作,，則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,，應(yīng)在-70℃以下。
3.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復(fù)凍融,。標本的反復(fù)凍融所產(chǎn)生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產(chǎn)生破壞作用，從而引起假陰性結(jié)果,。此外,，凍融標本的混勻亦應(yīng)注意,，不要進行劇烈振蕩，反復(fù)顛倒混勻即可,。
4.標本在保存中如出現(xiàn)細菌污染所致的混濁或絮狀物時,，應(yīng)離心沉淀后取上清檢測,。
5.要注意避免出現(xiàn)嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,，其有類似過氧化物的活性，因此,，在以HRP為標記酶的測定中,，如血清標本中血紅蛋白濃度較高,，則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,，從而與后面加入的HRP底物反應(yīng)顯色,。