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怎么挑選適宜的酶標板ELISA試劑盒
閱讀：953 發(fā)布時間：2019-8-20ELISA試劑盒免疫酶技能即是用酶(如辣根過氧化物酶)符號已知抗體(或抗原)，然后與安排標本在必定條件下反響,，假如安排中含有相應(yīng)抗原(或抗體),，抗原抗體彼此構(gòu)成的復(fù)合物中所帶酶分子遇到底物時，能催化底物水解,、氧化或復(fù)原,，發(fā)生顯色反響，這么就能夠識別出標本抗原(抗體)散布的方位和性質(zhì),，通過圖像剖析并可到達定量的意圖,。
ELISA試劑盒免疫酶技能與免疫熒光技能
免疫熒光技能雖已廣泛應(yīng)用于免疫學(xué)的研討與診斷，可是熒光抗體染色標本不能長時間保存,，對安排細胞的細微結(jié)構(gòu)分辨不清,，免疫酶技能則能戰(zhàn)勝上述缺乏，符號免疫酶技能的敏感性更優(yōu)于免疫熒光法，對白臘切片標本尤為適用,，為免疫病理研討拓荒了一條新途徑,，酶顯色商品具有較高的電子密度，通過恰當(dāng)處理還能夠進行免疫電鏡調(diào)查,，免疫酶組化技能分為酶符號法與非符號抗體技能,，前者是將酶通過交聯(lián)劑在抗體分子上，構(gòu)成酶符號抗體,。后者是將酶作為抗原與相應(yīng)的特異性抗體銜接進行的免疫反響,，稱為非符號抗體酶技能。
免疫酶技能運用酶催化底物反響的生物擴大作用,，進步特異性抗原-抗體免疫學(xué)反響查看敏感性的一種符號免疫技能,。該技能所用的酶請求純度高、催化反響的轉(zhuǎn)化率高,、專一性強,、性質(zhì)穩(wěn)定、來歷豐厚,、報價不貴,、制備成的酶標抗體或抗原性質(zhì)穩(wěn)定，繼續(xù)保存著它的活性部分和催化才能,。在受檢標本中不存在與符號酶一樣的酶,。別的它的相應(yīng)底物應(yīng)易于制備和保存，報價低廉,，有色商品易于測定,，光吸收高。
ELISA試劑盒固相載體選用免疫酶技能
免疫酶技能的首要試劑為固相的抗原或抗體,、酶符號的抗原或抗體和與符號酶直接相關(guān)的酶反響底物,。可作固相載體的物質(zhì)許多,，zui常用的是聚苯乙烯,。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的功能，抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保存本來的免疫活性,。聚苯乙烯為塑料,，可制成各種形式，在測定過程中,，它作為載體和容器，不參加化學(xué)反響,，加之它的報價低廉,，所以被普遍選用。
聚苯乙烯載體的形狀首要有三種：小試管,、小珠和微量反響板,。小試管的特色是還能兼作反響的容器,，zui終放入分光光度計中比色。小珠通常為直徑0.6cm的圓球,，外表經(jīng)磨砂處理后吸附面積大添加,。如用特別的洗刷器，在洗刷過程中使圓珠翻滾淋洗,，作用非常好,。zui常用的載體為微量反響板，于ELISA測定的商品也稱為ELISA板,，規(guī)范板形是8×12的96孔式,。為便于作少數(shù)標本的查看，有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的,，放入座架后,，大小與規(guī)范ELISA板一樣。ELISA板的特色是能夠同時進行很多標本的查看,，并可在特定的比色計上敏捷讀出成果,。如今已有多種自動化儀器用于微量反響板型的ELISA查看，包含加樣,、洗刷,、保溫、比色等過程,，對操作的規(guī)范化極為有利,。
杰出的ELISA板應(yīng)該是吸附功能好，空白值低,，孔底透明度高,，各板之間和同一板各孔之間功能附近。聚苯乙烯ELISA板因為配料的不一樣和技術(shù)的不一樣,，各種商品的質(zhì)量區(qū)別很大,。因而每一批號的聚苯乙烯制品在運用前須查看其功能。常用的查看辦法為：以必定濃度的人IgG(通常為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,，每孔內(nèi)參加恰當(dāng)稀釋的酶標抗人IgG抗體,，保溫后洗刷，加底物顯色,，停止酶反響后別離測每孔溶液的吸光度,。操控反響條件，使各讀數(shù)在0.8左右,。核算一切讀數(shù)的均勻值,。一切單個讀數(shù)與均勻讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA固相載體，聚氯乙烯板的特色為質(zhì)軟板薄,，可切開,，價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板,。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附功能比聚苯乙烯高,，但空白值有時也略高。
ELISA試劑盒為對比不一樣固相在某一ELISA測定中的好壞,，可用以下辦法加以查驗：用別的免疫學(xué)測定辦法選出一個典型的陽性標本和一個典型的陰性標本,。將它們別離進行一系列稀釋后，在不一樣的固相載體上按預(yù)訂的ELISA操作過程進行測定,，然后對比測定成果,。在哪一種載體上陽性成果與陰性成果區(qū)分zui大，這種載體即是這一ELISA測定的zui合適的固相載體,。
除塑料制品外,，固相酶免疫測定的載體還有兩種資料：一是微孔濾膜，如**纖維素膜,、尼龍膜等,，這類測定形式將在本章“膜載體的酶免疫測定”中介紹。另一種載體是以含鐵的磁性微粒的,，反響時固相微粒懸浮在溶液中,，具有液相反響的速率，反響完畢后用磁鐵招引作為別離的手法,，洗刷也非常便利,，但需裝備特別的儀器