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     培養(yǎng)細胞時為防止以下問題,，細胞將做冷凍保存:*、株化細胞產(chǎn)生性狀轉(zhuǎn)變,。第二,、污染。第三,、株化細胞之增殖或生理特性有特定之限制,，只能在一定的代數(shù)范圍內(nèi)進行增殖培養(yǎng)或進行特定實驗。目前可能解決這些困難的方法其中之一是細胞冷凍保存法,，將冷凍細胞儲于冷凍管中,，將其中一部分拿出來做一些必要的檢查，其它的冷凍細胞則在需要時拿出來解凍,，用來進行實驗,。本方法亦可節(jié)省繼代培養(yǎng)時所花費的勞力、物力,，并可防止培養(yǎng)中經(jīng)常發(fā)生意外事故,，喪失細胞珠。因此冷凍保存法為研究上之基本技術(shù)之一,。

說明 :

1.經(jīng)過冷凍保存后的細胞,，其生存率會下降,，冷凍時之冷卻速度，保存溫度,，解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類,、濃度等都可影響細胞存活率。
2. 一般而言,，４℃以下慢慢地冷凍,，保存于液態(tài)氮中（-196℃）。
3. 37℃快速解凍,。
4.保護劑（抗凍劑）：添加甘油 （glycerol） （ I0 %左右 ） 或dimethy1sulfoxide （DMSO） （ 5- 10% ） ,。
5.有些細胞如果采用上述的方法時，無法得到高的存活率,。此時,，則必需考慮可能傷害細胞的機制，添加劑之作用等而來找出適當(dāng)?shù)臈l件來修正,。

材料 :
1.增殖期之細胞 （9成滿）,，培養(yǎng)于培養(yǎng)皿中數(shù)個。
2.冷凍用培養(yǎng)基（2倍） : 培養(yǎng)基內(nèi)加入三倍血清及15% DMSO,，保存在冰箱中,。
3. 冷凍管、保利龍制容器,、鋁制ample支持棒,。

步驟:
1.準(zhǔn)備2 x 107cells/ml的細胞懸浮液。
2.冷凍用培養(yǎng)基（2倍） :以微溫水溶解DMSO,，在培養(yǎng)基中混合為15% （v/v）,。這是DMSO的二倍濃度之溶液。必須在進行實驗前在行配制,，配好后放在冰箱中,，使用量必須和細胞懸浮液的量相等；使用時維持在4℃,。
3.分裝: 在冷凍管管中分別加0.5ml （1/2冷凍管體積）冷凍用培養(yǎng)基（2倍）及2 x 10（7次方）cells/ml的細胞懸浮液,；等量混合。將蓋子扭緊后,，在管中部貼上膠帶密封,。
4.記載卷標(biāo) : 用抗凍marker pen在冷凍管上寫明細胞名稱、代數(shù),、冷凍的年,，月，日等所需要的項目。
5.放進冷卻的保利龍容器中,，而在- 80℃的超低溫槽中放置一個晚上,。
6.放進液態(tài)氮容器中及保存 : 在支持棒上裝上冷凍管，迅速地放進容器內(nèi),。