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    ELISA試劑盒應(yīng)嚴(yán)格遵照規(guī)定操作，必能得出準(zhǔn)確的結(jié)果,。首先應(yīng)選取的試劑,，良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件。所以ELISA試劑盒的購買，試劑質(zhì)量的保證以及實驗前實驗儀器的檢察都是很重要的,。

一,、標(biāo)本的采集及保存
    1、血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
    2,、血漿：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘,，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
    3,、細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請1000 x g離心20分鐘,，取上清即可檢測，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
    4、樣本處理：血清或血漿標(biāo)本推薦稀釋10,000倍,。
    注：以上標(biāo)本置4℃保存應(yīng)小于1周,，-20℃或-80℃均應(yīng)密封保存，-20℃不應(yīng)超過1個月,，-80℃不應(yīng)超過2個月,；標(biāo)本溶血會影響zui后檢測結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測,。
    二,、試劑的準(zhǔn)備 
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實驗中需用的試劑. ELISA中用的蒸餾水或去離子水,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的.自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正.從冰箱中取出的試 驗用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用.試劑盒中本次試驗不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
三,、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。
    四,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
    五,、洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次,，拍干,。
    六、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
    七,、測定：以空白空調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
    講述完了以上ELISA實驗的操作要點,，可以發(fā)現(xiàn)其實很多步驟都并不復(fù)雜，重要的是操作的時候一定要注重細(xì)節(jié),，熟能生巧,，才可以掌握ELISA實驗的精髓所在。