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      在ELISA的實(shí)際應(yīng)用中,，通過(guò)不同的設(shè)計(jì),，具體的方法步驟可有多種。如雙抗體夾心法,、間接法,、競(jìng)爭(zhēng)法、雙位點(diǎn)一步法,、捕獲法測(cè)IgM抗體,、應(yīng)用親和素和生物素的ELISA。在今天的技術(shù)內(nèi)容中,，上海恒遠(yuǎn)生物公司為您詳解ELISA方法設(shè)計(jì)的原理根據(jù),。

   ELISA以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原,、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的催化作用相結(jié)合起來(lái)的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù),。由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行,，每加入一種試劑孵育后,，可通過(guò)洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性,。

   應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本水平,。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入,，再與HRP標(biāo)記的抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB顯色,。

   TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品的濃度,。

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