化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
上海恒遠(yuǎn)公司歡迎你“大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子試劑盒",，該試劑盒適合檢測包括血清,、血漿,、尿液,、胸腹水、灌洗液,、腦脊液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本,，靈敏度*,。公司產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)，免費(fèi)提供代測服務(wù),。
詳細(xì)介紹
大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子試劑盒 大鼠ECF 大鼠elisa試劑盒
產(chǎn)品名稱：大鼠嗜酸粒細(xì)胞趨化因子試劑盒
各種種屬：人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全：血清、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
檢測方法：酶聯(lián)免疫法/酶免法（ELISA）
檢測原理:
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗小鼠Ferritin單抗包被于酶標(biāo)板上,，實(shí)驗(yàn)時標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品中的Ferritin會與單抗結(jié)合,，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗小鼠Ferritin抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素,?？剐∈驠erritin抗體與結(jié)合在單抗上的小鼠Ferritin結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,，游離的成分被洗去,。加入顯色底物，TMB在辣根過氧化物酶的催化下現(xiàn)藍(lán)色,，加終止液后變黃,。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，F(xiàn)erritin濃度與OD450值之間呈正比,，通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中Ferritin的濃度,。
標(biāo)本收集:
1. 血清：全血標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無熱原,，無內(nèi)毒素試管。
2. 血漿：抗凝劑推薦使用EDTA,，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測。避免使用溶血,，高血脂標(biāo)本,。
3. 其它生物標(biāo)本：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測
4. 標(biāo)本應(yīng)清澈透明,，懸浮物應(yīng)離心去除,。
5. 標(biāo)本收集后若不及時檢測，請按一次使用量分裝,，凍存于-20℃/-80℃電冰箱內(nèi),，避免反復(fù)凍融，1-6月內(nèi)檢測,4℃保存的應(yīng)在1周內(nèi)進(jìn)行檢測,。
6. 如果您的樣本中檢測物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品zui高值,，請根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋（建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn),，以確定稀釋倍數(shù)）,。
試驗(yàn)所需自備物品:
1. 酶標(biāo)儀（450nm波長濾光片）
2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10μl, 2-20μl, 20-200μl, 200-1000μl
3. 37℃恒溫箱, 雙蒸水或去離子水
4. 吸水紙
檢測前準(zhǔn)備工作:
1. 請?zhí)崆?0分鐘從冰箱中取出試劑盒,，平衡至室溫,。
2. 將濃縮洗滌液用雙蒸水稀釋（1:25）。未用完的放回4℃,。從冰箱中取出的濃縮洗滌液可能有結(jié)晶,，屬于正常現(xiàn)象,，可用40℃水浴微加熱使結(jié)晶*溶解后再配制洗滌液,。（加熱溫度不要超過50℃）使用時洗滌液應(yīng)為室溫。
3. 標(biāo)準(zhǔn)品: 加入標(biāo)準(zhǔn)品&標(biāo)本稀釋液1.0ml至凍干標(biāo)準(zhǔn)品中,，靜置10分鐘,，待其充分溶解后，輕輕混勻（濃度為5000 pg/ml）,。然后根據(jù)需要進(jìn)行倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋）,。建議配制成以下濃度： 2500、1250,、625,、312.5,、156.2、78.1,、39.05,、0 pg/ml。樣品稀釋液直接作為空白孔 0 pg/ml,。如配制2500pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml （不要少于0.5ml ）5000pg/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的EP管中,，混勻即可，其余濃度以此類推,。
4. 生物素化抗體工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μl/孔計(jì)）,，實(shí)際配制時應(yīng)多配制100-5. 酶結(jié)合物工作液：實(shí)驗(yàn)前計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需用量（以100μl/孔計(jì)），實(shí)際配制時應(yīng)多配制 100-200μl,。使用前15分鐘,，以生物素化抗體稀釋液稀釋濃縮生物素化抗體（1:100）成工作濃度。當(dāng)日使用,。
洗滌方法:
1. 自動洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μl,，注入與吸出間隔60秒。洗板5次,。
2. 手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體,，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μl,，浸泡1-2分鐘,，吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干,。洗板5次,。
操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫,；試劑或樣品配制時,，均需充分混勻，并盡量避免起泡,。
1,、 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。空白孔加樣品稀釋液100μl,，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,，注意不要有氣泡，加樣時將樣品加于酶標(biāo)板底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻,。給酶標(biāo)板覆膜，37℃孵育2小時,。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,，每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2,、 棄去液體,，甩干，每個孔中加入Detection Ab工作液 100μl（在使用前15分鐘內(nèi)配制）,，酶標(biāo)板加上覆膜,，37℃溫育1小時,。
3,、 棄去孔內(nèi)液體，甩干,，洗板 3次,，每次浸泡1-2分鐘，大約350μl /每孔,，甩干并在吸水紙上輕拍將孔內(nèi)液體拍干,。
4、 每孔加HRP Conjugate工作液（臨用前15分鐘內(nèi)配制）100μl,，加上覆膜,，37℃溫育1小時。
5,、 棄去孔內(nèi)液體,，甩干，洗板5次,，方法同步驟3,。
6、 每孔加底物溶液100μl,，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光孵育15分鐘左右（根據(jù)實(shí)際顯色情況酌情縮短或延長,，但不可超過30分鐘。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)孔出現(xiàn)明顯梯度時,，即可終止）,。
7、 每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng),，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。
8,、 立即用酶標(biāo)儀在450nm波長測量各孔的光密度（OD值）,。應(yīng)提前打開酶標(biāo)儀電源，預(yù)熱儀器,，設(shè)置好檢測程序,。
9、 實(shí)驗(yàn)完畢后將未用完的試劑按規(guī)定的保存溫度放回冰箱保存至有效期結(jié)束,。
實(shí)驗(yàn)操作注意事項(xiàng)：
1,、 保存：試劑盒中各試劑請按說明書提示合理存放。在儲存及溫育過程中避免將試劑暴露在強(qiáng)光中,。所有試劑瓶蓋須蓋緊或旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染,，否則可能會出現(xiàn)錯誤的結(jié)果。
2,、 酶標(biāo)板：剛開啟的酶標(biāo)板孔中可能會有少許水樣物質(zhì),，此為正常現(xiàn)象,，不會對實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成任何影響,。
3、 加樣：加樣或加試劑時,，*個孔與zui后一個孔的加樣時間間隔如果太大,，將會導(dǎo)致不同的 “預(yù)溫育”時間，從而明顯地影響到測量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。每次的加樣時間控制在10分鐘內(nèi),。推薦設(shè)置復(fù)孔實(shí)驗(yàn)。
4,、 溫育：為防止樣品蒸發(fā),，實(shí)驗(yàn)時必須給酶標(biāo)板覆膜；洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài),；嚴(yán)格遵守給定的溫育時間和溫度。
5,、 洗滌：洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干,，勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水。在讀數(shù)前要注意清除孔底殘留的液體和手指印,，以免影響酶標(biāo)儀讀數(shù),。
6、 試劑配制：Detection Ab及HRP Conjugate體積較小,，運(yùn)輸過程會使液體沾到管壁或瓶蓋,，因此使用前請手甩幾下或1000轉(zhuǎn)/分離心1min，以使附著管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。取用前,，請用移液器小心吹打4-5次使溶液混勻,。標(biāo)準(zhǔn)品、Detection Ab工作液,、HRP Conjugate工作液請依據(jù)所需的量配制使用,，并使用相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆,。請精確配制標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,，盡量不要微量配制（如吸取Detection Ab時，一次不要小于10μl）,，以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成濃度誤差,；請勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、Detection Ab工作液,、HRP Conjugate工作液,。若需要分次使用標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)按照每一次用量分裝，將其放在-20～-80℃貯存,。避免反復(fù)凍融,。
7,、 反應(yīng)時間的控制：加入底物后請定時觀察反應(yīng)孔的顏色變化（比如每隔5分鐘）,，如梯度已很明顯，請?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免顏色過深影響酶標(biāo)儀讀數(shù),。
8、 底物：底物請避光保存,，在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射,。
9、 混勻：充分輕微混勻?qū)Ψ磻?yīng)結(jié)果尤為重要,，使用微量振蕩器（使用zui低頻率）,，如無微 量振蕩器，可在反應(yīng)前手工輕輕敲擊酶標(biāo)板框混勻,。
10,、 安全：試驗(yàn)中請穿著試驗(yàn)服并帶乳膠手套做好防護(hù)工作。特別是檢測血液或者其他體液標(biāo) 本時,，請按國家生物試驗(yàn)室安全防護(hù)條列執(zhí)行,。
11、 不同批號的試劑盒組份不能混用（洗滌液和反應(yīng)終止液除外）
12,、 試驗(yàn)中所用的EP管和吸頭均為一次性使用,，嚴(yán)禁混用，否則將影響試驗(yàn)結(jié)果,！