詳細(xì)介紹
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶試劑盒 大鼠1,3-βD-Glu 大鼠elisa試劑盒
產(chǎn)品名稱(chēng):大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶試劑盒
各種種屬:人,、大小鼠,、豚鼠、兔子,、豬,、犬、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、組織勻漿,、組織液,、關(guān)節(jié)液、胸腔溢液等…
檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
大鼠1,3-βD葡葡糖苷酶試劑盒【注意事項(xiàng)】
1. 從-20℃取出的試劑盒,,在4℃解凍過(guò)夜,。盒內(nèi)每一瓶解凍的溶液在開(kāi)啟瓶蓋之前都要輕輕搖勻,避免解凍時(shí)出現(xiàn)的分層,,否則會(huì)出現(xiàn)濃度不均一的現(xiàn)象,。
2. 開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。
3. 配制各種試劑時(shí),,切記混勻,!
4. 用戶(hù)在初次使用試劑盒時(shí),應(yīng)將各種試劑管離心數(shù)分鐘,,以便試劑集中到管底,。
5. 建議所有豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè),。
6. 要嚴(yán)格避免操作過(guò)程中酶標(biāo)板干燥,。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活!
7. 為免交叉污染,,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管,。
【洗板方法】
手工洗板方法:吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,;將推薦的PBS或TBS洗滌緩沖液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),,應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,。
【樣品的準(zhǔn)備和保存】
樣品如果不立即分析,應(yīng)分裝后冷凍保存,,且避免反復(fù)凍融,。
血清——用干凈試管收集血液,室溫凝固2小時(shí)或4℃過(guò)夜,,離心1000×g 10分鐘,,收集血清。立即分析或分裝后-20℃冷凍保存,。
細(xì)胞培養(yǎng),、組織勻漿,、體液——離心去除沉淀,立即分析或分裝后-20℃冷凍保存,。
【樣品稀釋的一般原則】
用戶(hù)須查閱文獻(xiàn)了解標(biāo)本內(nèi)待測(cè)因子的含量,,決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù),以使稀釋后樣品中待測(cè)因子的濃度處于ELISA試劑盒的*檢測(cè)范圍,。樣品的稀釋?xiě)?yīng)有詳細(xì)記錄,。
【試劑的準(zhǔn)備和保存】
A. 豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。將凍干品管內(nèi)加入1ml樣品稀釋液,,*溶解后做倍比稀釋。
稀釋后的豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品在2小時(shí)內(nèi)使用,。
B.生物素標(biāo)記豬IL-1β抗體工作液:在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備,。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml)。
2. 按10ul生物素標(biāo)記豬IL-1β抗體加豬IL-1β抗體稀釋液990ul的比例配制工作液,。輕輕混勻,。
C.親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備:在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
1. 根據(jù)每孔需要0.1ml計(jì)算總的用量(實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml),。
2. 按10ul親和素-過(guò)氧化物酶復(fù)合物(ABC)加ABC稀釋液990ul的比例配制工作液,。輕輕混勻。
D. TMB顯色工作液的準(zhǔn)備:在使用之前30分鐘,,按TMB顯色液A 9份加 TMB顯色液B 1份的比例配制TMB顯色工作液,。
【操作程序】
1. 確定本次檢測(cè)所需的已包被豬IL-1β抗體的酶標(biāo)板孔數(shù)目。
2. 將倍比稀釋的豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品各0.1ml依次加入一排7孔中,,1孔只加樣品稀釋液的作為對(duì)照,。處理后的標(biāo)本按100ul每孔加入。
3. 酶標(biāo)板加上蓋,,37℃反應(yīng)90分鐘,。
4. 反應(yīng)后用自動(dòng)洗板機(jī)吸去酶標(biāo)板內(nèi)的液體;或甩去酶標(biāo)板內(nèi)液體,,再對(duì)著吸水紙拍幾下,。洗滌2次。
5. 將準(zhǔn)備好的生物素豬IL-1β抗體工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)60分鐘,。
6. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌3次,每次浸泡1分鐘左右,。
7. 將準(zhǔn)備好的ABC工作液按每孔0.1ml依次加入,。37℃反應(yīng)30分鐘。
8. 0.01M TBS或0.01M PBS洗滌5次,,每次浸泡1-2分鐘左右,。
9. 按每孔0.1ml依次加入TMB顯色工作液,,37℃避光反應(yīng),反應(yīng)過(guò)程中,,要經(jīng)常的觀(guān)察,,當(dāng)肉眼可見(jiàn)豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色,后3-4孔差別不明顯時(shí),,即可加入TMB終止液0.1ml/孔,。(顯色反應(yīng)zui長(zhǎng)不要超過(guò)30分鐘)。
10. 用酶標(biāo)儀在450nm測(cè)定O.D.值,。
11. 根據(jù)樣品的吸光值在坐標(biāo)上找出對(duì)應(yīng)的濃度,。用戶(hù)也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了N倍,,其實(shí)際濃度應(yīng)該×N,。
【操作程序總結(jié)】:
準(zhǔn)備試劑,樣品和豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品和豬IL-1β標(biāo)準(zhǔn)品,,37℃反應(yīng)90分鐘
洗板2次,,加入生物素化豬IL-1β抗體工作液,37℃反應(yīng)60分鐘
洗板3次,,加入ABC工作液,,37℃反應(yīng)30分鐘
洗板5次,加入TMB顯色液,,37℃反應(yīng)
加入TMB終止液
30分鐘之內(nèi)讀OD值
計(jì)算標(biāo)本待測(cè)因子含量
【檢測(cè)范圍】:1000pg/ml→15.6pg/ml,。
【敏感性】: <5pg/ml
【特異性】: 系統(tǒng)和其它細(xì)胞因子無(wú)交叉反應(yīng)。
【保存】: -20℃ [短期內(nèi)(如兩周)可4℃]
【有效期】: 12個(gè)月(-20℃),。
【用途】: 用于體外定量分析液體標(biāo)本(通用型),。