詳細介紹
產(chǎn)品名稱:大鼠游離睪酮試劑盒
各種種屬:人,、大小鼠、豚鼠,、兔子,、豬、犬,、牛,、羊…
標(biāo)本齊全:血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、組織液,、關(guān)節(jié)液,、胸腔溢液等…
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:For laboratory use only,Not for drug or other uses.本公司可提供免費代測服務(wù).
操作步驟
1. 使用前,將所有試劑充分混勻,。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差,。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔,、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時。
4. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,振蕩30秒,,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A,、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8. 取出酶標(biāo)板,迅速加入50ul終止液,,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
操作步驟:
實驗開始前,,請?zhí)崆芭渲煤盟性噭?,試劑或樣品稀釋時,均需混勻,,混勻時盡量避免起泡,。每次檢測都應(yīng)該做標(biāo)準(zhǔn)曲線。如樣品濃度過高時,,用樣品稀釋液進行稀釋,,以使樣品符合試劑盒的檢測范圍。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,,37℃反應(yīng)120分鐘,。
為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液,。
2. 棄去液體,,甩干,不用洗滌,。每孔加生物素標(biāo)記抗體工作液 100μl(取1μl生物素標(biāo)記抗體加99μl生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,,輕輕混勻,在使用前一小時內(nèi)配制),,37℃,60分鐘,。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,,甩干。
4. 每孔加辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素工作液(同生物素標(biāo)記抗體工作液) 100μl,,37℃,,60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,,棄去孔內(nèi)液體,,甩干,洗板5次,,每次浸泡1-2分鐘,,350μl/每孔,,甩干,。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),,此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍色,,后3-4孔梯度不明顯,即可終止),。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同,。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性,,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值),。 在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行檢測 .
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大鼠游離睪酮試劑盒 大鼠F-TESTO elisa檢測