詳細(xì)介紹
產(chǎn)品名稱:人抗存活素抗體/生存蛋白試劑盒
英文名稱:Human anti-Survivin antibody,Surv ELISA KIT
產(chǎn)品規(guī)格:96人份/48人份
檢測方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(ELISA)
產(chǎn)品用途:科研ELISA檢測試劑盒.本公司可提供實(shí)驗(yàn)代測服務(wù).
檢測原理: 采用雙抗體夾心ABC-ELISA法
產(chǎn)品種屬齊全有:人,小鼠,,大鼠,豚鼠,,豬,,犬,,兔,牛,,羊,,猴,兔,,馬等動物種屬,。
待檢樣本:體液,血清,,血漿,,細(xì)胞培養(yǎng)上清液,尿液,,組織勻漿,心房水標(biāo)本等等,。
試劑的準(zhǔn)備:
按試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水,,包括用于洗滌的,,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計測量較正,。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時放回冰箱保存。
洗滌:
洗滌在ELISA過程中雖不是一個反應(yīng)步驟,,但卻也決定著實(shí)驗(yàn)的成敗,。ELSIA就是靠洗滌來達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過洗滌以清除殘留在板孔中沒能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì),,以及在反應(yīng)過程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì),。聚苯乙烯等塑料對蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的,而在洗滌時又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來,??梢哉f在ELISA操作中,洗滌是zui主要的關(guān)鍵技術(shù),,應(yīng)引起操作者的高度重視,,操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌,不得馬虎,。洗滌的方式除某些ELISA儀器配有特殊的自動洗滌儀外,,手工操作有浸泡式和流水沖洗式兩種,過程如下:
(1)浸泡式 a.吸干或甩干孔內(nèi)反應(yīng)液,;b.用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,,即甩去);c.浸泡,,即將洗滌液注滿板孔,,放置1-2分鐘,,間歇搖動,浸泡時間不可隨意縮短,;d.吸干孔內(nèi)液體,。吸干應(yīng)*,可用水泵或真空泵抽吸,,也可甩去液體后在清潔毛巾或吸水紙上拍干,;e.重復(fù)操作c和d,洗滌3-4次(或按說明規(guī)定),。在間接法中如本底較高,,可增加洗滌次數(shù)或延長浸泡時間。微量滴定板多采用浸泡式洗滌法,。洗滌液多為含非離子型洗滌劑的中性緩沖液,。聚苯乙烯載體與蛋白質(zhì)的結(jié)合是疏水性的,非離子型洗滌劑既含疏水基團(tuán),,也含親水基團(tuán),,其疏水基團(tuán)與蛋白質(zhì)的疏水基團(tuán)借疏水鍵結(jié)合,從而削弱蛋白質(zhì)與固相載體的結(jié)合,,并借助于親水基團(tuán)和水分子的結(jié)合作用,,使蛋白質(zhì)回復(fù)到水溶液狀態(tài),從而脫離固相載體,。洗滌液中的非離子型洗滌劑一般是吐溫20,,其濃度可在0.05%-0.2%之間,高于0.2%時,,可使包被在固相上的抗原或抗體解吸附而減低試驗(yàn)的靈敏度,。
(2)流水沖洗式 流水沖洗法zui初用于小珠載體的洗滌,洗滌液僅為蒸餾水甚至可用自來水,。洗滌時附接一特殊裝置,,使小珠在流水沖擊下不斷地滾動淋洗,持續(xù)沖洗2分鐘后,,吸干液體,,再用蒸餾水浸泡2分鐘,吸干即可,。浸泡式猶如盆浴,流水沖洗式則好比淋浴,,其洗滌效果更為*,,且也簡便、快速,。已有實(shí)驗(yàn)表明,,流水沖洗式同樣也適用于微量滴定板的洗滌,。洗滌時設(shè)法加大水流量或加大水壓,讓水流沖擊板孔表面,,洗滌效果更佳,。
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