實驗原理
本試劑盒應用酶聯(lián)免疫競爭法測定標本中鎖鏈素（Des）水平,。用純化的鎖鏈素（Des）
抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中加入鎖鏈素（Des）,，和 HRP 標記的
鎖鏈素（Des）抗原,，使它們競爭結合，,，經過*洗滌后加底物 TMB 顯色,。樣本顏色的深
淺和樣品中的鎖鏈素（Des）的含量呈負相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD
值）,，通過標準曲線計算樣品中鎖鏈素（Des）的含量,。

鎖鏈素（Des）ELISA試劑盒-競爭法標本要求
1．標本處理：（1）水樣 采集后經 -20℃反復凍融三次，再經玻璃纖維過濾后,，備查
（2）組織 樣品用丁醇：甲醇：水(5：25：70 V：V：V)抽提,，或按相
關文獻提取進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，
可將標本放于-20℃保存，備查
2．不能檢測含 NaN3 的樣品,，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟
1. 加樣：分別設標準孔、空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準孔中加 50 微升,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl，
然后再加待測樣品 10μl（樣品最終稀釋度為 5 倍）,。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
2. 加酶：每孔加入酶標試劑 50μl,，空白孔除外,。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 60 分鐘。
4. 配液：將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去,，如此
重復 5 次，拍干,。
6. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50μl,，再加入顯色劑 B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色
15 分鐘.
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7. 終止：每孔加終止液 50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
8. 測定：以空白孔調零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止
液后 15 分鐘以內進行。

計算
以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的
OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與 OD 值計算出標
準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，
即為樣品的實際濃度,。

鎖鏈素（Des）ELISA試劑盒-競爭法注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未
用完，板條應裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果,。
3．各步加樣均應使用加樣器,，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差,。一次加樣時間最好
控制在 5 分鐘內,，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。
4． 請每次測定的同時做標準曲線,，最好做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本 OD 值
大于標準品孔第一孔的 OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計
算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。
5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存,。
7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。
9．本試劑不同批號組分不得混用。

檢測范圍：
6pg/ml-280pg/ml
規(guī)格：
96 份/盒
保存條件及有效期
1．試劑盒保存：,；2-8℃,。
2．有效期：6 個月