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    ELISA試劑盒由于其操作簡便，靈敏度高,，是蛋白檢測技術中應用zui廣泛的技術之一,。用ELISA試劑盒實驗的方法有很多種,，今天為大家講解ELISA實驗之競爭法!

    競爭法可用于測定抗原,，也可用于測定抗體。以測定抗原為例,，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結(jié)合,，因此結(jié)合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量成反比。操作步驟如下：

   (1)將特異抗體與固相載體連接,，形成固相抗體,。洗滌。
   (2)待測管中加受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液,，使之與固相抗體反應,。如受檢標本中無 抗原，則酶標抗原能順利地與固相抗體結(jié)合,。如受檢標本中含有抗原,，則與酶標抗原以同樣的機會與固相抗體結(jié)合，競爭性地占去了酶標抗原與固相載體結(jié)合的機會,，使酶標抗原與固相載體的結(jié)合量減少,。參考管中只加酶標抗原，保溫后,，酶標抗原與固相抗體的結(jié)合可達zui充分的量,。洗滌。
   (3)加底物顯色：參考管中由于結(jié)合的酶標抗原zui多,，故顏色zui深,。參考管顏色深度與待測管顏色深度之差，代表受檢標本抗原的量,。待測管顏色越淡,，表示標本中抗原含量越多。
Elisa間接法,、競爭法,、捕獲法，應用親和素和生物素的ELISA

     親和素是一種糖蛋白,，可由蛋清中提取,。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結(jié)合?，F(xiàn)在使用更多的是從鏈霉菌中提取的鏈霉親和素,。生物素又稱維生素H，分子量244.31,，存在于蛋黃中,。用化學方法制成的衍生物，生物素-羥 基琥珀亞胺酯(BNHS)可與蛋白質(zhì),、糖類和酶等多種類型的大小分子形成生物素化的產(chǎn)物,。親和素與生物素的結(jié)合，雖不屬免疫反應,，但特異性強,，親和力大，兩者一經(jīng)結(jié)合就極為穩(wěn)定,。由于1個親和素分子有4個生物素分子的結(jié)合位置,，可以連接更多的生物素化的分子，形成一種類似晶格的復合體,。因此把親和素和生物素與ELISA偶聯(lián)起來,，就可大大提高ELISA的敏感度。

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