日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

    細(xì)胞凋亡發(fā)生時(shí),，內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶將分解核小體區(qū)間的雙鏈DNA，但核小體本身由于由組蛋白緊密結(jié)合而免受切割,，單克隆抗體可以與核小體形成夾心結(jié)構(gòu),，可通過(guò)檢測(cè)核小體判斷細(xì)胞是否經(jīng)歷凋亡事件。

(一) 原理

細(xì)胞凋亡的發(fā)生,，是由于鈣-鎂依賴(lài)性核酸酶進(jìn)入核小體間切割DNA,產(chǎn)生180bp～200bp或其倍數(shù)的核小體片段,。而核小體由于與組蛋白H2A、H2B,、H3和H4形成緊密復(fù)合物而不被核酸內(nèi)切酶切割,。采用雙抗體夾心酶免疫法，應(yīng)用小鼠抗DNA和抗組蛋白的單克隆抗體,，與核小體片段形成夾心結(jié)構(gòu),，可特異性檢測(cè)細(xì)胞溶解物中的核小體片段。

(二)材料與試劑

1.采用Boehringer Mannheim公司試劑盒,，生物標(biāo)記的小鼠抗組蛋白單克隆抗

體,。

2.過(guò)氧化物酶(-POD)標(biāo)記的小鼠抗DNA單克隆抗體

3.鏈霉親合素包被的微孔板

4.DNA-組蛋白復(fù)合物，作為陰性對(duì)照,。

5.ABTS底物

6.溶解緩沖液

7.溫育緩沖液

8.底物緩沖液

(三)樣品

1.培養(yǎng)細(xì)胞或離體細(xì)胞的裂解物細(xì)胞裂解步驟：收集細(xì)胞,，離心后,，用200µl溶細(xì)胞緩沖液重新懸浮，室溫下作用30min,。

2.培養(yǎng)細(xì)胞的上清液

3.血漿(血清)

(四)操作方法

1.取樣品離心后(1 000r/min,10min),吸取20µl上清液,，加入鏈霉親合素包被的培養(yǎng)板孔中。

2.另加入80µl免疫反應(yīng)試劑含抗-DNA-POD,、抗組蛋白-生物素及溫育緩沖液(按1︰1︰18混合),，室溫下孵育2h(置搖床上，250r/min),。

3.取上清,，用300µl溫育緩沖液洗滌3次，小心移去洗滌液,。

4.加入100µl底物緩沖液,，室溫下孵育使顏色變化至適合(置搖床上)。

5.盡快作比色分析(10min～20min內(nèi)),，用底物緩沖液作空白對(duì)照,，以波長(zhǎng)405nm，參考波長(zhǎng)492nm進(jìn)行檢測(cè),。

(五)結(jié)果判定

按下列公式計(jì)算細(xì)胞釋放的單/低聚核小體片段的特別聚集值：

注：mU=吸收值(10-3)=雙孔吸收值的平均OD值-底物OD值,，若樣品的吸收值超過(guò)比色測(cè)定范圍，應(yīng)適當(dāng)稀釋后再檢測(cè),。

小結(jié)：這里總結(jié)了ELISA法檢測(cè)細(xì)胞凋亡實(shí)驗(yàn)原理,、試劑配制、操作步驟,，希望對(duì)大家有用呢,，有不當(dāng)?shù)牡胤剑€望指正,。細(xì)胞凋亡檢測(cè)更多詳情,，可點(diǎn)擊查看