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在臨床實(shí)驗(yàn)室，對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,，通常的做法是,，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來(lái)即用，而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問(wèn)題,，ELISA試劑盒其直接的后果是對(duì)一些弱陽(yáng)性標(biāo)本的檢測(cè)出現(xiàn)假陰性,。因此在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將試劑盒先從冰箱中拿出來(lái),，在室溫下放置20分鐘以上后,，再進(jìn)行測(cè)定，以使試劑盒在使用前與室溫平衡,。這樣做的目的,，主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中，能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,，以滿足測(cè)定要求,。其次，上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司還指出以下幾點(diǎn)：

ELISA試劑盒的操作步驟

1,、取出試劑盒,，室溫（20-25℃）放置30分鐘,。

2,、分組：取出96孔板,，根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)，把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組（6個(gè)濃度）,、空白孔、待測(cè)樣品組,。

3,、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：準(zhǔn)備小試管6 只，依次編好號(hào)碼,，先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,，然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中，充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,，充分混勻,；再在該試管中取100ul加入第三只試管中，充分混勻,；再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,，充分混勻；再在該試管中取100ul加入第五只試管中,，充分混勻,；然后在該試管中取100ul，棄掉,。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品,。

注：為減少實(shí)驗(yàn)誤差，保證準(zhǔn)確性,，建議設(shè)置復(fù)孔,。

4、加樣：依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,；空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水,；其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻。

5,、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

6、洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒棄去,，如此重復(fù)5 次,，拍干。

7,、加酶標(biāo)溶液：標(biāo)準(zhǔn)品組,、待測(cè)樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液（空白對(duì)照孔除外）。

8,、溫育：酶標(biāo)板用封板紙密封后,，放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí)。

9,、洗板：用稀釋后的洗滌液注滿每孔,，靜置15-30s，充分清洗酶標(biāo)板5次,，用吸水紙*拍干,。

10、顯色：各孔加入顯色劑A液50ul后,，再加入顯色劑B液50ul,。

11、終止：25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,，加入50ul終止液,。

12、讀板：在450nm波長(zhǎng)讀取各孔的OD值,。

注：讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,，讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi)，以免影響準(zhǔn)確性,。

    目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,， ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的,，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用,。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存. 

    本公司提供的elisa試劑盒具有靈敏度高,、質(zhì)量可靠、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn),。歡迎新老客戶,。