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ELISA試劑盒測定中試劑的準(zhǔn)備Z為關(guān)鍵
閱讀:795 發(fā)布時(shí)間:2016-3-4在臨床實(shí)驗(yàn)室,,對(duì)試劑準(zhǔn)備一般不太注意,通常的做法是,在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用,,而忽略了這種做法有可能影響后面溫育時(shí)間不夠的問題,ELISA試劑盒其直接的后果是對(duì)一些弱陽性標(biāo)本的檢測出現(xiàn)假陰性,。因此在實(shí)驗(yàn)開始前,,將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20分鐘以上后,,再進(jìn)行測定,,以使試劑盒在使用前與室溫平衡。這樣做的目的,,主要是為了在后面的溫育反應(yīng)步驟中,,能使反應(yīng)微孔內(nèi)的溫度能較快地達(dá)到所要求的高度,,以滿足測定要求。其次,,上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司還指出以下幾點(diǎn):
ELISA試劑盒的操作步驟
1,、取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置30分鐘,。
2,、分組:取出96孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),,把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理,。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6個(gè)濃度)、空白孔,、待測樣品組,。
3、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,,依次編好號(hào)碼,,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul加入一只已編好號(hào)的試管中,,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,,充分混勻;再在該試管中取100ul加入第三只試管中,,充分混勻,;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻,;再在該試管中取100ul加入第五只試管中,,充分混勻;然后在該試管中取100ul,,棄掉,。第六只試管作為0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。
注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,,保證準(zhǔn)確性,,建議設(shè)置復(fù)孔。
4,、加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入50ul的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中,;空白對(duì)照孔加入50ul的蒸餾水;其余微孔中先加樣品40ul然后再加生物素標(biāo)記的抗體10ul,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
5,、溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。
6、洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30 秒棄去,,如此重復(fù)5 次,拍干,。
7,、加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入50ul的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外),。
8,、溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于37℃恒溫孵育1小時(shí),。
9、洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,,靜置15-30s,,充分清洗酶標(biāo)板5次,用吸水紙*拍干,。
10,、顯色:各孔加入顯色劑A液50ul后,再加入顯色劑B液50ul,。
11,、終止:25-37℃下避光反應(yīng)10-15分鐘,加入50ul終止液,。
12,、讀板:在450nm波長讀取各孔的OD值。
注:讀板時(shí)必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,,讀板時(shí)間控制在終止反應(yīng)后的30分鐘內(nèi),,以免影響準(zhǔn)確性。
目前的商品ELISA試劑盒中的洗板液均需在實(shí)驗(yàn)室使用時(shí)對(duì)所提供的濃縮液稀釋配制,, ELISA中用的蒸餾水或去離子水,,包括用于洗滌的,應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的,。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測量較正,。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存.
本公司提供的elisa試劑盒具有靈敏度高、質(zhì)量可靠,、操作簡單等特點(diǎn),。歡迎新老客戶。