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    我們都知道在ELISA的測定中，有很多方面的影響,，在ELISA的檢測中也是非常重要的的一個部分，下面我們從結(jié)合物這一方面來說明。

    結(jié)合物：在ELISA中,，用酶標記的抗體或抗原統(tǒng)稱為結(jié)合物，此為進行ELISA檢測的關(guān)鍵試劑,。常規(guī)使用ELISA法的主要問題是能夠簡便地制備酶結(jié)合物,，而此種制備好的酶結(jié)合物要求穩(wěn)定，具有很高的酶活性,，抗原或抗體的特異性,，產(chǎn)量高及成本低。
    用什么樣的酶來標記抗原或抗體呢,？可根據(jù)以下幾點來選擇適當?shù)拿浮?br />    1,、酶制品的純度及活力高，催化效力也高,，放大倍數(shù)大（即一個酶分子能催化幾十幾百個底物分子發(fā)生反應的酶）,。
    2、酶及制備好的酶結(jié)合物在檢測或貯存中能保持穩(wěn)定,。
    3,、酶制劑易得、價廉.
    4,、既要適用于標記抗原,，又適用于標記抗體，標記后不影響抗原或抗體的免疫學特性,，也不降低酶的活性,。
    5、酶的反應產(chǎn)物穩(wěn)定,，檢測時簡便,、快速,。在定量測定中產(chǎn)物必須是可溶性的。
    6,、要有安全,、價廉、易得的底物,。
    符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶,，一般用分子量為5×105（Alkaline Phospatase,簡稱AP），辣根過氧化物酶（Horse Radish Peroxidase,簡稱HRP,分子量為4×104）,另外尚有葡萄糖氧化酶,，β-半乳糖甙酶,，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等。其中以前兩種（AP和HRP）zui為常用,。
AP活力高,，制備好的酶結(jié)合物可加NaN3防腐，但此種酶不易獲得,，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取,，而且價格比較昂貴。因此,，目前國內(nèi)外大多使用HRP,。HRP活性也高，價格較便宜,。但制得酶結(jié)合物不能加NaN3防腐,。因NaN3能抑制HRP的活性，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝,，保存冰箱,，一般可用1-2年。

    由于HRPzui為常用,，故先把HRP的一般性質(zhì)介紹一下,，以便在制備酶結(jié)合物時可引起注意。

    (HRP的性質(zhì)):HRP系從辣根菜的根中所提取,，這種酶是無色酶蛋白與暗棕色的鐵卟啉（E鐵血素）相結(jié)合的一種醣蛋白,，可簡寫成由多個（6-7個）同功 酶所組成。分子量約為40000,，等電點為PH7.2,。能被58-62%飽和硫酸銨沉淀，在PH3.5-12均較穩(wěn)定,。63℃15分鐘,，室溫數(shù)周、甲苯和其他苯類有機溶劑處理都不影響它的活性,。

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