日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

 恒遠生物介紹軟瓊脂克隆形成實驗

原理：

 

細胞接種存活率只表示接種細胞后貼壁的細胞數(shù),，但貼壁后的細胞不一定每個都能增殖和形成克隆。而形成克隆的細胞必為貼壁和有增殖活力的細胞,?？寺⌒纬陕史从臣毎后w依賴性和增殖能力兩個重要性狀。由于細胞生物學(xué)性狀不同,，細胞克隆形成率差別也很大,，一般初代培養(yǎng)細胞克隆形成率弱，傳代細胞系強,；二倍體細胞克隆形成率弱,，轉(zhuǎn)化細胞系強；正常細胞克隆形成率弱,，腫瘤細胞強,。并且克隆形成率與接種密度有一定關(guān)系，做克隆形成率測定時,，接種細胞一定要分散成單細胞懸液,，直接接種在碟皿中，持續(xù)一周,，隨時檢查,，到細胞形成克隆時終止培養(yǎng)。

基本步驟：

（1）取對數(shù)生長期細胞,，用0.25%胰蛋白酶消化并輕輕吹打,，使之成為單細胞，作活細胞計數(shù),，用含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細胞密度至1×106細胞/L,。然后根據(jù)實驗要求作梯度倍數(shù)稀釋。

（2）用蒸餾水分別制備出1.2%和0.7%兩個濃度的低溶點瓊脂糖液,，高壓滅菌后,，維持在40℃中不會凝固。

（3）按1:1比例使1.2%的瓊脂糖和2×DMEM培養(yǎng)基（含有2×抗生素和20%的小牛血清）混合后,，取3mL混合液注入直徑6cm平皿中（10cm平皿加7～10mL）,，冷卻凝固，可作底層瓊脂置CO2溫箱中備用,。

（4）按1:1比例讓0.7%的瓊脂糖和2×DMEM培養(yǎng)基在無菌試管中相混以后,，再向管中加入0.2mL的細胞懸液，充分混勻,，注入鋪有1.2%瓊脂糖底層平皿中,，逐形成雙瓊脂層。待上層瓊脂凝固后,，置入37℃ 5%CO2溫箱中培養(yǎng)10～14天,。

（5）把平皿放置在倒置顯微鏡下,，觀察細胞克隆數(shù)。計算形成率,。

軟瓊脂培養(yǎng)法常用檢測腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞系,。試驗中瓊脂與細胞相混時，瓊脂溫度不宜超過40℃,。接種細胞的密度每平方厘米不超過35個,，一般6cm的平皿接種1000個細胞。正常細胞在懸浮狀態(tài)下不能增殖,，不適用于軟瓊脂克隆形成試驗,。