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人血清白蛋白（HSA）Elisa試劑盒說明書

人血清白蛋白（HSA）Elisa試劑盒僅供研究使用,。

檢測范圍： 96T    2.5 ng/ml -80 ng/ml

實驗原理:本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血清白蛋白（HSA）水平。用純化的人血清白蛋白（HSA）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入血清白蛋白（HSA），再與HRP標記的人血清白蛋白（HSA）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血清白蛋白（HSA）呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值）,，通過標準曲線計算樣品中人血清白蛋白（HSA）濃度,。

使用目的：本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關液體樣本中血清白蛋白（HSA）含量,。

人血清白蛋白（HSA）Elisa試劑盒組成

1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶

2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（160 ng/ml） 0.5ml×1瓶

3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份

5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張

6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個

標本要求:

1．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

操作步驟:

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

80 ng/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液

40 ng/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液

20 ng/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液

10 ng/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液

5 ng/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）,、標準孔,、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
 
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去，如此重復5次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。
 
7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）,。

11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行,。

計算:以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

注意事項:

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內,，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。

保存條件及有效期:

1．試劑盒保存：2-8℃。

2．有效期：6個月