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豚鼠輪狀病毒(RV)試劑盒使用說明書
閱讀:1324 發(fā)布時間:2011-11-17提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 101KB |
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資料類型 | WORD 文檔 | 瀏覽次數(shù) | 1324次 |
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96T
使用目的:
豚鼠輪狀病毒(RV)試劑盒用于測定豚鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中輪狀病毒(RV)表達(dá),。
實(shí)驗(yàn)原理
豚鼠輪狀病毒(RV)試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中豚鼠輪狀病毒(RV)表達(dá),。用純化的豚鼠輪狀病毒(RV)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,,可與樣品中輪狀病毒(RV)相結(jié)合,,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的輪狀病毒(RV)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中豚鼠輪狀病毒(RV)的存在與否,。
試劑盒組成
1 | 30倍濃縮洗滌液 | 20ml×1瓶 | 7 | 終止液 | 6ml×1瓶 |
2 | 酶標(biāo)試劑 | 6ml×1瓶 | 8 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 12 | 密封袋 | 1個 |
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
豚鼠輪狀病毒(RV)試劑盒操作步驟
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔,、陽性對照2孔,、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
2. 加樣:分別在陰,、陽性對照孔中加入陰性對照,、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,,
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干,。
6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。
7. 溫育:操作同3,。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染,。
5.底物請避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),,使用雙波長檢測時,,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。終止液為2M的硫酸,,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:,;2-8℃,。
2.有效期:6個月