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恒遠(yuǎn)文獻(xiàn):冰王燒燙膏對(duì)大鼠深Ⅱ度燒傷的修復(fù)及機(jī)制研究
閱讀:580 發(fā)布時(shí)間:2020-1-10提 供 商 | 上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司 | 資料大小 | 276KB |
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冰王燒燙膏對(duì)大鼠深Ⅱ度燒傷的修復(fù)及機(jī)制研究
馮啟凱1,曲梅花1,,季萬(wàn)勝2,,李 艷1,辛 亭1,,黎瀚文1,,劉鳳嬌1
( 1. 濰坊醫(yī)學(xué)院,山東省高校應(yīng)用藥理學(xué)重點(diǎn)強(qiáng)化建設(shè)實(shí)驗(yàn)室,,山東 濰坊 261053;2. 濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院,,山東 濰坊 261031)基金項(xiàng)目: 國(guó)家教育部留學(xué)回國(guó)人員科研啟動(dòng)基金( 2011 年第 43批)
作者簡(jiǎn)介: 馮啟凱,男,,碩士研究生
通信作者: 曲梅花,,女,副教授,,碩士生導(dǎo)師,,研究方向: 神經(jīng)內(nèi)分泌
藥理學(xué),E-mail: qumeihua@ hotmail. com
摘要: 目的 研究探討冰王燒燙膏對(duì)大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的修復(fù)及機(jī)制,。方法 雄性 Wistar 大鼠 60 只,,制備深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的大鼠模型后,隨機(jī)分為燒燙膏組,、京萬(wàn)紅組,、燒傷模型組,每組 20 只,。測(cè)量大鼠燒傷后 1,、3、7,、13,、21 d 皮膚創(chuàng)面的愈合率和血清 TNF-α 含量; 燒傷后 4d 免疫熒光法測(cè) glut-2 受體的表達(dá)變化。結(jié)果 燒傷后 1 d 各組創(chuàng)面愈合率比較,,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P > 0. 05) ,,7,、13、21 d 燒燙膏能明顯縮短燒傷大鼠皮膚創(chuàng)面愈合的時(shí)間,,提高愈合率( P < 0. 01) ,。燒傷后 1、3,、7,、13、21 燒燙膏組大鼠血清 TNF-α 水平呈明顯下降,,與模型組比較差異有顯著性( P < 0. 05,,P < 0. 01) 。和模型組比較,,燒燙膏組 glut-2 受體表達(dá)數(shù)目增加,,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P < 0. 01) 。結(jié)論 冰王燒燙膏對(duì)燒傷皮膚創(chuàng)面具有良好的修復(fù)作用并可能與降低血清 TNF-α 水平和增加 glut-2 受體表達(dá)有關(guān),。
關(guān)鍵詞: 燒燙膏; 燒傷; 創(chuàng)面愈合; TNF-α; glut-2 受體; 熒光抗體反應(yīng)
冰王燒燙膏系運(yùn)用白礦油,、白芝麻油、冰片等為主藥制備而成的一種外用中藥復(fù)合乳劑,,在燒傷臨床沿用多年,,具有促進(jìn)表皮細(xì)胞、組織細(xì)胞再生,,有效避免瘢痕形成,,減輕燒燙傷對(duì)皮膚的損傷度的功效,然而其作用機(jī)制一直未明,。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)觀察冰王燒燙膏對(duì)大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)的治療作用,探討其可能的作用機(jī)制,,為進(jìn)一步促進(jìn)其在臨床廣泛推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)和理論基礎(chǔ),。
1 材料與方法
1. 1 材料
1. 1. 1 試驗(yàn)動(dòng)物 雄性 Wistar 大鼠 60 只,SPF 級(jí),,重量 200 ~ 220 g,,由山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室提供,許可證號(hào): SCXK 魯 20130001,。
1. 1. 2 主要試劑和試驗(yàn)儀器 冰王燒燙膏( 平輿冰王生物工程有限公司,,批號(hào) 20140105) ; 京萬(wàn)紅
( 天津 達(dá) 仁 堂 京 萬(wàn) 紅 藥 業(yè) 有 限 公 司,國(guó) 藥 準(zhǔn) 字Z12020440,,批號(hào) 211897) ; 硫化鈉( 天津博迪化工股份有限公司) ; 腫瘤壞死因子-α 酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒( 上海恒遠(yuǎn)生化試劑有限公司) ; Anti-Glut-2R ( 北京博奧森生物技術(shù)有限公司) ; 高速冷凍離心機(jī)( 德國(guó) SIGMA 公司) ; 奧林巴斯 IX71 顯微鏡( 日本奧林巴斯公司) ,。
1. 2 試驗(yàn)方法
1. 2. 1 大鼠分組及背部燒傷模型的制備 wistar雄性大鼠 60 只,隨機(jī)分為三組即燒燙膏組,,京萬(wàn)紅
組,,燒傷模型組,,每組 20 只。用 8% 硫化鈉溶液在實(shí)驗(yàn)前 24 h 對(duì)大鼠背部?jī)蓚?cè)皮膚進(jìn)行脫毛,,脫毛面積 5 cm × 6 cm 左右,,約 1 min 后用水充分清洗脫毛區(qū),以防過(guò)度刺激皮膚,。用 3% 戊ba比妥鈉( 40 mgkg - 1) 腹腔麻醉后將大鼠四肢盡量伸展,,于俯臥位固定在木質(zhì)操作板上。室溫下,,將注滿沸水直徑4 cm 一端無(wú)堵頭的中空大離心管直立于大鼠脫毛部,,與皮膚緊密接觸且保證水不流出。沸水與皮膚持續(xù)接觸 15 s,,將操作板及大鼠連同塑料管迅速翻轉(zhuǎn),,造成深Ⅱ度燒傷模型( 經(jīng)病理組織學(xué)檢查) ,立即腹腔內(nèi)注射乳酸鈉林格氏液 5 mL 抗休克[1],。
1. 2. 2 創(chuàng)面處理及給藥 燒燙膏組,、京萬(wàn)紅組每天早中晚 3 次分別涂以燒燙膏和京萬(wàn)紅; 模型組在
相同時(shí)段涂無(wú)菌生理鹽水??偨o藥時(shí)間持續(xù) 4 周,。為防其舔舐傷口,所有大鼠造模后均在其頭頸部套
自制紙硬殼項(xiàng)圈,。在給藥期間,,所有大鼠單獨(dú)分籠飼養(yǎng),自由飲水并給予普通飼料喂養(yǎng),。
1. 2. 3 觀察指標(biāo) ( 1) 大體觀察每次換藥時(shí)肉眼對(duì)比觀察各組燒傷創(chuàng)面水腫滲出程度,,是否有分泌
物及創(chuàng)周紅腫等。( 2) 觀察創(chuàng)面愈合率按照 Nagelschmidt 法,,于燒傷后不同時(shí)間用透明塑料薄膜覆
蓋于大鼠創(chuàng)面描記創(chuàng)面邊緣,,用規(guī)格相同紙殼按照描記的邊緣剪下同樣大小的面積進(jìn)行稱重。創(chuàng)面
愈合判斷標(biāo)準(zhǔn)是痂皮自行脫落且有新生上皮形成,。以燒傷第 1 天的面積作為原始面積,,以后各時(shí)間點(diǎn)
測(cè)量的面積均和原始面積比。創(chuàng)面的面積轉(zhuǎn)換為紙殼的重量,,計(jì)算公式如下:創(chuàng)面愈合面積百分比 = ( 原始燒傷面積 - 各時(shí)間點(diǎn)創(chuàng)面面積) /原始燒傷面積 × 100% ,。記錄實(shí)驗(yàn)后 1、3,、7,、13、21 d 各組大鼠創(chuàng)面愈合情況并對(duì)各組大鼠創(chuàng)面的平均愈合天數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和計(jì)算,。
1. 2. 4 TNF-α 的檢測(cè) 各組隨機(jī)選取大鼠 10 只于燒傷后 1,、3,、7、13,、21 d 經(jīng)眼內(nèi)眥采集靜脈血 1 mL,,室溫靜置于離心管 15 min 自凝,3 000 r·min - 1( r= 16 cm) ,,離心 10 min 后取上層血清,,于 - 80℃ 保存?zhèn)溆谩Q逯械?TNF-α 表達(dá)水平用 ELISA 法檢測(cè),,具體按說(shuō)明書(shū)所述方法操作,。
1. 2. 5 Glut-2 受體的表達(dá) 燒傷后 4 d 各組隨機(jī)選取大鼠 10 只頸椎脫臼處死,取末端回腸 2 ~ 3
cm,,于 4% 多聚甲醛固定 24 h,,石蠟切片,抗原修復(fù),,封閉,,37℃ 孵 育 1 h,Glut-2R ( 兔 抗 鼠,,1 ∶ 200 ) +0. 03% TritonX-100 室溫過(guò)夜,,PBS 漂洗,熒光二抗FITC( 山羊抗兔,,1∶ 200) ,,37℃ 避光孵育 1. 5 h,PBS漂洗,,甘油封片,,熒光顯微鏡下觀察,隨機(jī)選取 10個(gè)高倍視野( 200 × ) ,,記錄每個(gè)視野陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目,,取其平均值。
1. 2. 6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 實(shí)驗(yàn)資料以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差( x± s) 表示,,用 SPSS13. 0 進(jìn)行重復(fù)測(cè)量數(shù)據(jù)的方差分析,兩兩比較采用 LSD-t 檢驗(yàn)的方法,,P < 0. 05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,。
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