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技術文章

ELISA技術的操作要點

閱讀:1075          發(fā)布時間:2016-3-7

zui近,,有幾位客戶我司ELISA技術的操作要點,我司特在此做出解答:

的試劑,,良好的儀器和正確的操作是保證ELISA檢測結果準確可靠的必要條件,。ELISA 的操作因固相載體的形成不同而有所差異,國內(nèi)醫(yī)學檢驗一般均用板式點,。本文將敘述板式ELISA 各個操作步驟的注意要點,,珠式、管式及磁性球ELSIA,,國外試劑均與特殊儀器配合應用,,兩者均有詳細的使用說明,嚴格遵照規(guī)定操作,,必能得出準確的結果。

其中zui重要的是標本的采取和保存:

可用作ELISA測定的標本十分廣泛,,體液(如血清),、分泌物(唾液)和排泄物(如尿液、糞便)等均可作標本以測定其中某種抗體或抗原成份,。有些標本可直接進行測定(如血清,、尿液),有些則需經(jīng)預處理(如糞便和某些分泌物),。大部分ELISA 檢測均以血清為標本,。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,其他成份均同等于血清,。制備血漿標本需借助于抗凝劑,,而血清標本只要待血清自然凝固、血塊收縮后即可取得,。除特殊情況外,,在醫(yī)學檢驗中均以血清作為檢測標本。在ELISA 中血漿和血清可同等應用,。

血清標本可按常規(guī)方法采集,,應注意避免溶血,紅細胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質,,以HRP 為標記的ELISA 測定中,,溶血標本可能會增加非特異性顯色。
血清標本宜在新鮮時檢測,。如有細菌污染,,菌體中可能含有內(nèi)源性 HRP,也會產(chǎn)生假陽性反應,。如在冰箱中保存過久,,其中的可發(fā)生聚合,,在間接法 ELISA 中可使本底加深。
一般說來,,在 5 天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,,超過一周測定的需低溫冰存。凍結血清融解后,,蛋白質局部濃縮,,分布不均,應充分混勻宜輕緩,,避免氣泡,,可上下顛倒混和,不要在混勻器上強烈振蕩,?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢吮緫入x心或過濾,澄清后再檢測,。反復凍融會使抗體效價跌落,,所以測抗體的血清標本如需保存作多次檢測,宜少量分裝冰存,。保存血清自采集時就應注意無菌操作,,也可加入適當防腐劑。

如果您還有什么疑問或建議可以來電我司技術人員,,謝謝,!

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