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  細胞凍存融化的原則是緩凍速融細胞凍存（慢）
1.預(yù)先配制凍存液：10 % DMSO + 90%胎牛血清，4℃冰箱保存預(yù)冷,；
2.用胰酶對細胞進行消化：倒去培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基或用槍小心吸去培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基,，PBS沖洗兩次，用胰酶消化細胞（盡可能溫和）,；

3.將預(yù)冷的凍存液懸浮細胞,，用滴管輕輕吹打混勻。

4.在每支凍存管中加入1ml細胞液,，密封后標記凍存細胞名稱和凍存日期,。
5.凍存步驟的細致直接關(guān)系到細胞復(fù)蘇時的活力，如果有程序降溫器（放在-80℃冰箱一整夜,，放入液氮罐）,；或者可以在4℃，2h,；然后轉(zhuǎn)到-20℃,，2h；-80℃,，2h,；放入液氮罐。

細胞凍存管融化（快）

1.將細胞凍存管取出,，浸入37℃水浴鍋內(nèi),，輕輕晃動，注意融化,，當(dāng)融得只剩一個小冰塊時,，將細胞插入冰中,。
2.加入4℃預(yù)冷的培養(yǎng)基，用手指輕彈懸浮細胞團,。
3.250g離心10min,，去除上清液，再加入培養(yǎng)基,，輕輕懸浮,。
4.盡量將細胞中的DMSO洗去，計數(shù),。
 
在細胞凍存過程中，所結(jié)的冰晶對細胞傷害較大,，所以過程一定要慢,，DMSO能減少冰晶傷害。
在細胞復(fù)蘇過程中,，要快,，以減少融化對細胞的傷害，其實還是冰晶的問題,。DMSO浸潤的細胞非常脆弱,，所以可要盡快將DMSO去除，一定要輕,。

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