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    在操作酶聯(lián)免疫試劑盒實驗時,，有很多技術(shù)問題是比較常見且易錯的,，而就是這些問題困惑不少實驗操作員。上海恒遠(yuǎn)根據(jù)技術(shù)部的問題處理總結(jié),，這些常見的酶聯(lián)免疫實驗問題您也在問,？

一、為什么必須設(shè)置復(fù)孔,？

     為獲得更準(zhǔn)確的實驗結(jié)果,，強烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進行復(fù)孔檢測，因為復(fù)孔檢測可以：計算平均值,，確保實驗結(jié)果更準(zhǔn)確,；解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；計算CV值,，對實驗的操作和試劑盒的精密度進行評估,。

二、重復(fù)性差怎么辦,？

    1.樣品數(shù)量不一,，加樣時間長短不一(恒遠(yuǎn)來解決：重復(fù)某一樣品時，加樣時間盡可能與*次接近),。

    2.酶標(biāo)儀濾光片不對或輸入波長不對(恒遠(yuǎn)來解決：TMB顯色用450/630波長),。

    3.酶標(biāo)儀測定重復(fù)性差(恒遠(yuǎn)來解決：校對酶標(biāo)儀),。

三、為什么標(biāo)準(zhǔn)曲線線性較差

    需要按照推薦方式保存標(biāo)準(zhǔn)品,；溶解標(biāo)準(zhǔn)品之前需短暫離心,，*收集粉末；確保標(biāo)準(zhǔn)品*溶解和混勻,，然后再進行后續(xù)的系列稀釋步驟,，確保每一步都充分混勻且移液；顯色的恰當(dāng)終止,；選擇合適的數(shù)學(xué)擬合方程繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,。

四、為什么所有試劑和檢測樣本要平衡至室溫后再進行加樣操作

    溫度是ELISA結(jié)合反應(yīng)的重要影響因素,。為了使所有樣本在一致的溫度下反應(yīng),，實驗前務(wù)必將所有試劑平衡至室溫，包括檢測樣本,。避免因溫度的動力學(xué)反應(yīng)差異而導(dǎo)致ELISA檢測結(jié)果的不準(zhǔn)確,。

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