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上海恒遠(yuǎn)重點分析一抗二抗的選擇
閱讀：2201 發(fā)布時間：2015-3-12 根據(jù)我公司技術(shù)員的總結(jié)了解,，不少客戶對一抗、二抗的選擇方面甚是苦惱,，您是否也正面對此問題而不知怎樣做呢,？在今天的內(nèi)容里，上海恒遠(yuǎn)為您重點分析一抗二抗的選擇,。
通常情況下,，某一特定的實驗中可能同時有幾種二抗可供選擇，如何能選擇到該實驗的二抗,，需要綜合以下幾個方面進(jìn)行考慮：
*,、一抗的物種來源
一抗是在什么物種來源的，相應(yīng)的二抗也要是抗該物種的抗體,。例如,，如果一抗是在小鼠體內(nèi)制備的，那么你就應(yīng)當(dāng)選擇抗小鼠的二抗,，如果一抗是在兔體內(nèi)制備的，那么二抗就應(yīng)當(dāng)是抗兔的抗體,。至于二抗本身是在什么動物中制備的對二抗的質(zhì)量并無明顯的影響,。
第二、一抗是屬于哪個類或亞類
二抗需與一抗的類別或亞類相匹配,。這通常是針對單克隆抗體而言,。多克隆抗體主要是IgG類免疫球蛋白，因此相應(yīng)的二抗就是抗IgG抗體.
單克隆抗體的類別及亞類通常會在產(chǎn)品列表中列出,，如果你的一抗是小鼠IgM,，那么相應(yīng)的二抗就應(yīng)當(dāng)是抗小鼠IgM，或是抗小鼠IgG抗體。
如果單克隆一抗是小鼠IgG的某一亞類(IgG1,，IgG2a,，IgG2b，IgG3),，那么幾乎所有的抗小鼠IgG都可以與之結(jié)合,，或者你也可以選擇專門針對這一亞類的二抗，例如,，如果你的一抗是小鼠IgG1,，那么你可以選擇抗IgG1的二抗，此種抗體在雙標(biāo)記實驗中尤其適合,。
如果您不知道一抗是哪一類別或亞類,，那么抗小鼠IgG是一個不錯的選擇，因為此種抗體可以識別大多數(shù)類型的IgG免疫球蛋白,。
下面總結(jié)了幾種具有不同特異性的二抗：
針對整個抗體分子(H＋L)具有特異性：如anti-IgG(H+L),，此類抗體既可以與抗體的重鏈結(jié)合也可以與輕鏈結(jié)合，即與抗體分子的 Fc,，F(xiàn)(ab’)2/Fab部分均可反應(yīng),，anti-IgG(H+L)也可以與其他免疫球蛋白家族反應(yīng)，因為所有的免疫球蛋白都具有相同的輕鏈,。
針對Fab片段具有特異性：這類抗體與重鏈輕鏈均可以結(jié)合,，由于它們可以與輕鏈反應(yīng)，它們同時也已和具有相同輕鏈的其他種類的免疫球蛋白反應(yīng),。
這對Fc片段或重鏈具有特異性：這類抗體和重鏈的Fc部分反應(yīng),，一次它們是類別特異性的(即gamma鏈特異性抗體只與IgG反應(yīng)，mu鏈特異性抗體只識別IgM,，依此類推),。
輕鏈特異性：與所有類別的抗體反應(yīng)，因為所有類別的抗體均具有相同的lambda鏈或kappa鏈,。
經(jīng)過吸附處理的二抗：不同來源的免疫球蛋白含有相似的結(jié)構(gòu),，抗一個物種的抗體可能與其他物種發(fā)生交叉反應(yīng)，一次有些二抗經(jīng)過了動物或人類IgG吸附處理,，以減少非特異性背景,。例如，如果是小鼠的組織或細(xì)胞,，那么選擇經(jīng)小鼠血清或IgG吸附處理過的二抗可以減少非特異性結(jié)合,。但是此種抗體識別表位的數(shù)量被大大減少。
第三,、選擇哪種形式的二抗,，是整個IgG分子,，F(xiàn)(ab’)2片段，還是Fab片段,？
整個IgG分子：此種抗體適用于多數(shù)情況,。
F(ab’)2片段：該種抗體是由兩個靠二硫鍵連接的用于結(jié)合抗原的Fab片段組成，這些抗體用在特定的情況中,，如需要避免抗體與具有Fc受體的細(xì)胞結(jié)合的情況,。
Fab片段：它們只有一個結(jié)合位點，一般用來封閉內(nèi)源性免疫球蛋白,。
第四,、選用耦聯(lián)有哪種探針的二抗？
一般來講,，耦聯(lián)到二抗上的探針主要有酶(辣根過氧化酶HRP和堿性磷酸酶AP或其衍生物APAAP,，PAP)，熒光基團(tuán)(FITC, RRX, TR, PE)和生物素,。選用哪種探針的二抗主要取決于具體的實驗,。對于western blot和ELISA，zui常用的二抗是酶標(biāo)二抗,，而細(xì)胞或組織標(biāo)記實驗(細(xì)胞免疫化學(xué),，組織免疫化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù))中通常使用熒光基團(tuán)標(biāo)記的二抗,，免疫組化中也可以使用辣根過氧化酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的二抗,。如果想要更大程度的放大檢測信號，可以使用biotin/avidin檢測系統(tǒng),。
第五,、抗體的純度：
親和層析純化的抗體一般更受人們歡迎，因為這些產(chǎn)品的純度zui高,，產(chǎn)生的非特異性背景zui少,。但是有些情況下也要考慮到純化過程中損失的IgG部分，因為其中含有親和力很高的抗體,，尤其是當(dāng)目的抗原存在的量很小的時候,，高親和性的IgG部分就顯得尤為重要。