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技術(shù)文章

兔免疫球蛋白G2(IgG2)ELISA實驗說明

閱讀:94          發(fā)布時間:2025-1-9

檢測范圍                                                          

5μg/ml - 260μg/ml

 

使用目的

本試劑盒用于測定兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中免疫球蛋白G2(IgG2)含量,。

 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中兔免疫球蛋白G2(IgG2)水平。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,,往包被的微孔中依次加入免疫球蛋白G2(IgG2),再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,,經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白G2(IgG2)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中兔免疫球蛋白G2(IgG2)濃度,。

 

標(biāo)本要求 

1.標(biāo)本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗,,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

 

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。

256μg/ml

5號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

128μg/ml

4號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

64μg/ml

3號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

32μg/ml

2號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

16μg/ml

1號標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

 

2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。

3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用

5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,拍干,。

6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,,空白孔除外。

7. 溫育:操作同3,。

8. 洗滌:操作同5,。

9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色),。

11. 測定:以空白孔調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

 

完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員,。上海恒遠(yuǎn)生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商,,代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進口/國產(chǎn)ELISA試劑盒,專業(yè)供應(yīng)科研實驗所需的培養(yǎng)基,,抗體,,動物血清血漿,標(biāo)準(zhǔn)品對照品,,化學(xué)試劑,,酶聯(lián)免疫試劑盒,白介素試劑盒,,金標(biāo)檢測試劑盒,,微生物,蛋白質(zhì),,ELISA種屬涵蓋廣,,憑借多年行業(yè)經(jīng)驗,完善的售后服務(wù),,高質(zhì)量的產(chǎn)品,。如果您有實驗上的問題歡迎來咨詢。

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