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檢測范圍：                                                         

4pg/ml-220pg/ml

 

使用目的：

本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中E3泛素連接酶(DTX3L)含量,。

 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中人E3泛素連接酶(DTX3L)水平。用純化的人E3泛素連接酶(DTX3L)抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入E3泛素連接酶(DTX3L)，再與HRP標(biāo)記的E3泛素連接酶(DTX3L)抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,，經(jīng)過充分洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的E3泛素連接酶(DTX3L)呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中人E3泛素連接酶(DTX3L)濃度,。

 

標(biāo)本要求 

1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗,。若不能馬上進(jìn)行試驗,，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

 

操作步驟

1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋,。

 

2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）,、標(biāo)準(zhǔn)孔,、待測樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）,。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻,。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4. 配液：將30倍（48T的20倍）濃縮洗滌液用蒸餾水30倍（48T的20倍）稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體,，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30秒后棄去,，如此重復(fù)5次，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3,。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

11. 測定：以空白孔調(diào)零,，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）,。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行,。

 

 

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