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恒遠生物|生化檢驗中各種空白的概念
閱讀:389 發(fā)布時間:2024-4-18對所謂"試劑空白""樣本空白""水空白""杯空白"等"空白"名詞,下面和大家解釋說明一下:
1,、試劑空白:
由于生化測試測量的吸光度為相對吸光度,,所以從理論上來講,,所有終點法的測試都需要把試劑本身的吸光度扣除(試劑本身的吸光度就是試劑空白),。在傳統(tǒng)手工法中,每次測定至少做三個管:測定管、標準管,、空白管,,其中空白管是試劑加蒸餾水,測出來也就是試劑空白,。因為操作環(huán)境,、儀器狀態(tài)、試劑穩(wěn)定性等變異,,所以要求每次都要測定試劑空白,,稱為實時試劑空白。
在全自動分析儀上,,大都是模擬手工操作,,許多全自動分析儀為追求速度,,在設(shè)計上采用折中方法來測定試劑空白,。以日立全系列生化儀為例,該系列分析儀做不了實時試劑空白,,因為它們?nèi)窍燃訕颖竞蠹釉噭?,為了折中,在定標時做一個試劑空白,,保存起來,,需要扣除試劑空白時再減這個預(yù)先保存的值。對于日立的這種試劑空白測定很多儀器都采用這種方法,,也叫做試劑空白校準,。
在自動生化儀上的試劑空白一般表現(xiàn)為零點吸光度,該吸光度是通過校準確立的,。
2,、樣本空白:
由于溶血,、脂血、黃疸等情況,,會導致樣本本身的吸光度對測試結(jié)果造成影響,。所以對樣本本身吸光度的測量,即樣本空白,,可以去除這方面的影響,,測量方法是按照正常測試的試劑和樣本量,把試劑換成蒸餾水或生理鹽水來進行測量,。自動生化儀上,,很難界定樣本空白。與消除樣本空白有關(guān)的大約有如下幾點:
①在雙試劑測定時,,加入試劑和樣品后的吸光度可一定程度上扣除樣本空白,。(故有單試劑不能扣除樣本空白的說法)。
②現(xiàn)在的試劑抗干擾能力都較強,,比如雙試劑,,R1加入后先和樣本孵育一段時間,將血紅蛋白,、脂肪,、膽紅素等反應(yīng)掉,再加入R2開始測定反應(yīng),,在一定范圍內(nèi)都可以消除樣本空白,。
③現(xiàn)代全自動生化儀大多采用雙波長測定,雙波長測定的原則是根據(jù)干擾組分和待測物質(zhì)吸收光譜的峰形特征,,選擇兩個波長和,,使干擾組分在這兩個波長處的吸光系數(shù)相等,使待測物質(zhì)在兩波長處的吸光系數(shù)有顯著差別,。以兩波長分別測定分析溶液的吸光度,, 以兩個吸光度值之差(△A)計算。這也可以扣除一部分樣本空白,。
④有些儀器,例如日立系列,有“血清信息"功能的設(shè)置,,做法單獨占用一個空白通道來計算,叫做樣品空白校準,。
3,、水空白:
比色杯在加入水以后的吸光度。水空白的意義主要是對光路系統(tǒng)進行檢查和校正,,如光源,,比色杯等,同時在計算中起到消除“杯差"的作用。日立7060中的Cell Blank(杯空白)測定的就是水空白,。