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恒遠(yuǎn)生物|微生物染色方法
閱讀：404 發(fā)布時間：2024-2-26 微生物染色方法一般分為單染色法和復(fù)染色法兩種,。前者用一種染料使微生物染色，但不能鑒別微生物,。復(fù)染色法是用兩種或兩種以上染料,，有協(xié)助鑒別微生物的作用。故亦稱鑒別染色法,。常用的復(fù)染色法有革蘭氏染色法和抗酸性染色法,，此外還有鑒別細(xì)胞各部分結(jié)構(gòu)的（如芽胞、鞭毛,、細(xì)胞核等）特殊染色法,。食品微生物檢驗(yàn)中常用的是單染色法和革蘭氏染色法。
１,、單染色法
用一種染色劑對涂片進(jìn)行染色,，簡便易行，適于進(jìn)行微生物的形態(tài)觀察,。在一般情況下,，細(xì)菌菌體多帶負(fù)電荷，易于和帶正電荷的堿性染料結(jié)合而被染色,。因此,，常用堿性染料進(jìn)行單染色，如美蘭,、孔雀綠,、堿性復(fù)紅、結(jié)晶紫和中性紅等,。若使用酸性染料,，多用剛果紅,、伊紅、藻紅和酸性品紅等,。使用酸性染料時,，必須降低染液的PH值，使其呈現(xiàn)強(qiáng)酸性（低于細(xì)菌菌體等電點(diǎn)）,，讓菌體帶正電荷,，才易于被酸性染料染色。
單染色一般要經(jīng)過涂片,、固定,、染色、水洗和干燥五個步驟,。
染色結(jié)果依染料不同而不同：
石碳酸復(fù)紅染色液：著色快,，時間短，菌體呈紅色,?！ ?/span>
美蘭染色液：著色慢，時間長,，效果清晰,，菌體呈蘭色。
草酸銨結(jié)晶染色液：染色迅速,，著色深，菌體呈紫色,。
２,、革蘭氏染色法
革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法，1884年由丹麥醫(yī)師Gram創(chuàng)立,。
細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶染色,，而經(jīng)碘液媒染后，用酒精脫色,，在一定條件下有的細(xì)菌此色不被脫去,，有的可被脫去，因此可把細(xì)菌分為兩大類,，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+）,，后者為革蘭氏陰性菌（G-）。為觀察方便,，脫色后再用一種紅色染料如堿性蕃紅等進(jìn)行復(fù)染,。陽性菌仍帶紫色，陰性菌則被染上紅色,。有芽胞的桿菌和絕大多數(shù)和球菌,，以及所有的放線菌和真菌都呈革蘭氏正反應(yīng),；弧菌，螺旋體和大多數(shù)致病性的無芽胞桿菌都呈現(xiàn)負(fù)反應(yīng),。
革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌在化學(xué)組成和生理性質(zhì)上有很多差別,，染色反應(yīng)不一樣。現(xiàn)在一般認(rèn)為革蘭氏陽性菌體內(nèi)含有特殊的核蛋白質(zhì)鎂鹽與多糖的復(fù)合物,，它與碘和結(jié)晶紫的復(fù)合物結(jié)合很牢,，不易脫色，陰性菌復(fù)合物結(jié)合程度底,，吸附染料差,，易脫色，這是染色反應(yīng)的主要依據(jù),。
另外,，陽性菌菌體等電點(diǎn)較陰性菌為低，在相同PH條件下進(jìn)行染色,，陽性菌吸附堿性染料很多,，因此不易脫去，陰性菌則相反,。所以染色時的條件要嚴(yán)格控制,。例如，在強(qiáng)堿的條件下進(jìn)行染色,，兩類菌吸附堿性染料都多,，都可呈正反應(yīng)；PH很低時,，則可都呈負(fù)反應(yīng),。此外，兩類菌的細(xì)胞壁等對結(jié)晶紫—碘復(fù)合物的通透性也不一致,，陽性菌透性小,，故不易被脫色，陰性菌透性大,，易脫色,。所以脫色時間，脫色方法也應(yīng)嚴(yán)格控制,。
革蘭氏染色法一般包括初染,、媒染、脫色,、復(fù)染等四個步驟,，具體操作方法是：
１）涂片固定。
２）草酸銨結(jié)晶紫染1分鐘。
３）自來水沖洗,。
４）加碘液覆蓋涂面染1分鐘,。
５）水洗，用吸水紙吸去水分,。
６）加95%酒精數(shù)滴,，并輕輕搖動進(jìn)行脫色，30秒后水洗,，吸去水分,。
７）蕃紅梁色液（稀）染10秒鐘后,，自來水沖洗,。干燥，鏡檢,。
染色的結(jié)果,，革蘭氏正反應(yīng)菌體都呈紫色，負(fù)反應(yīng)菌體都呈紅色,。
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