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小鼠血清白蛋白(ALB)注意事項(xiàng)！
閱讀：2168 發(fā)布時(shí)間：2022-6-28【產(chǎn)品名稱】
中文名稱：小鼠血清白蛋白(ALB)酶聯(lián)免疫試劑盒
【包裝規(guī)格】
96T/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用,，本試劑盒用于測(cè)定小鼠血清樣本中血清白蛋白(ALB)含量,。
【試劑盒組成】
序號(hào)中文名稱 英文名稱規(guī)格
130倍濃縮洗滌液Wash solution(30X)20ml×1瓶
2酶標(biāo)試劑HRP-Conjugate reagent6ml×1瓶
3酶標(biāo)包被板Microelisa stripplate12孔×8條
4樣品稀釋液Sample diluent6ml×1瓶
5顯色劑A液Chromogen Solution A6ml×1瓶
6顯色劑B液Chromogen Solution B6ml×1/瓶
7終止液Stop solution6ml×1瓶
8標(biāo)準(zhǔn)品（960μg/mL）Standard0.5ml×1瓶
9標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液Standard diluent1.5ml×1瓶
10說明書Product Description1份
11封板膜Sealing plate membrane 2張
12密封袋Sealing bag1個(gè)
注意：使用前請(qǐng)檢查試劑盒中試劑的標(biāo)簽和數(shù)量與表格是否一致,。
需要但未提供的材料及耗材
1,、酶標(biāo)儀（建議儀器使用前提前預(yù)熱）
2、精密移液器,、吸頭,、加樣槽
3、蒸餾水或去離子水
4,、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5,、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、EP管
7,、無粉一次性乳膠手套
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1,、2-8℃保存，切勿冷凍,，有效期6個(gè)月,。
2、開封使用后,，包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中，密閉自封袋,，并將全部試劑放回2-8℃冰箱,。
注意：試劑盒內(nèi)酶標(biāo)條可拆卸，按實(shí)驗(yàn)需求可分多次使用,；使用后的剩余試劑盒建議在實(shí)驗(yàn)后1 個(gè)月內(nèi)使用完畢,。產(chǎn)品過期時(shí)間以盒子上的標(biāo)簽為準(zhǔn)，保質(zhì)期內(nèi)所有組分都確保是穩(wěn)定的,。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,，如Thermo MK3,，或者國產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
1.樣本類型和采集
血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置0.5-2小時(shí)或4℃過夜,，然后1000×g離心20 分鐘,，取上清即可，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
血漿：用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,，去除殘留血液（勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果），稱重后將組織剪碎,。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS（一般按1:9的重量體積比,，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整,，并做好記錄,。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑）加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨,。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融,。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,，取上清即可檢測(cè)，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
細(xì)胞裂解液: 吸棄培養(yǎng)液，用PBS（0.01 M,，pH 7.4）將細(xì)胞洗一遍,。用細(xì)胞刮刮下細(xì)胞（不能用胰酶和EDTA 處理），加入2-5 mL PBS（0.01 M,，pH 7.4）,。懸浮細(xì)胞可省略。收集細(xì)胞懸液,，4℃ 1000×g離心10min,，棄去培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS潤(rùn)洗3次。加入適量的預(yù)冷PBS或非變性細(xì)胞裂解液（臨用前加入蛋白酶抑制劑）重懸細(xì)胞,通常6孔板一個(gè)孔的細(xì)胞量需要150-250μL PBS重懸,。 將樣品放入-20℃或-80℃,，使樣品冷凍，再放室溫解凍樣品,，反復(fù)凍融3次,，使細(xì)胞充分裂解,也可將樣品進(jìn)行超聲破碎，以達(dá)到裂解的目的,。4℃ 10000×g 離心10min,，除去細(xì)胞碎片，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘,，取上清即可檢測(cè),，或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融,。
2.樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,，可以儲(chǔ)存72h，在- 20℃或-80℃可以儲(chǔ)存6個(gè)月及以上,。樣本收集后,，不是一次檢測(cè)完，請(qǐng)按一次用量分裝凍存,，避免反復(fù)凍融,。
注意：
1.試劑準(zhǔn)備：試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用。準(zhǔn)備一次實(shí)驗(yàn)所需要的酶標(biāo)條,，其它的可從微孔板上拆下,，密封，按照說明書要求保存,，以備下次使用,。
2.加樣：實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的滅菌吸頭，避免污染,。加樣時(shí)注意不要有氣泡產(chǎn)生,，將樣品加于酶標(biāo)板底部，盡量不觸及孔壁,，輕輕晃動(dòng)混勻,。與反應(yīng)試劑加入一樣，加樣過程中第一個(gè)孔與最后一個(gè)孔加樣時(shí)間間隔盡量?。ㄒ话憧刂圃?0 分鐘以內(nèi)）,，如果太大，將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)溫育"時(shí)間,，從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性,。為了測(cè)值的準(zhǔn)確性，推薦設(shè)置復(fù)孔進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。
3.溫育：為防止樣品蒸發(fā),，實(shí)驗(yàn)時(shí)請(qǐng)將加上蓋或覆膜的酶標(biāo)板置于濕盒內(nèi)，以避免液體蒸發(fā),，洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,，任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài)，同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的溫育時(shí)間和溫度,。
4.洗滌：濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果,。充分洗滌非常重要,，在每次洗滌過程中，都要將洗滌液*甩干,。洗滌過程中反應(yīng)孔內(nèi)殘留的洗滌液應(yīng)在吸水紙上拍干,，勿將吸水紙直接放入反應(yīng)孔中吸水，同時(shí)要輕輕擦除板底殘留的液體和手指印,，避免影響最后的酶標(biāo)儀讀數(shù),。如果使用自動(dòng)洗板機(jī)，請(qǐng)?jiān)谑炀毷褂煤笤儆糜谡綄?shí)驗(yàn)過程中,。
5.反應(yīng)時(shí)間的控制：加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化,，如觀察到顏色較深，請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),，避免反應(yīng)過強(qiáng)而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù),。
6.底物：底物請(qǐng)避光保存，在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射,。
【注意事項(xiàng)】
1.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,，最好做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第一孔的OD值）,，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定,，計(jì)算時(shí)請(qǐng)最后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
2.封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
3.為免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和試管,。
4.要嚴(yán)格避免操作過程中酶標(biāo)板干燥,。干燥會(huì)使酶標(biāo)板上生物成份迅速失活。
5.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),。
6.顯色時(shí)間供參考,，因用戶實(shí)驗(yàn)室條件差異，最佳顯色時(shí)間會(huì)有所不同,。
7.所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
8.本試劑不同批號(hào)組分不得混用,。
9.揭封板膜和覆蓋封板膜時(shí)應(yīng)避免用力過大導(dǎo)致液體濺出,。
【結(jié)果計(jì)算】
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,，將樣品的OD值代入方程式，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實(shí)際濃度。