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大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒使用說明書
閱讀：2205 發(fā)布時間：2011-8-22大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍： 96T
0.5µg/L - 12µg/L
使用目的：
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒用于測定大鼠血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）含量,。
實驗原理
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）水平。 用純化的大鼠Ⅱ型
膠原（Col Ⅱ）抗體包被微孔板,，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入Ⅱ型膠原（Col
Ⅱ），再與HRP 標記的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過
*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化
成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波
長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）濃度,。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品（24µg/L） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml×1瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本要求
1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能
馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋,。
12µg/L 5 號標準品 150µl的原倍標準品加入150µl標準品稀釋液
6µg/L 4 號標準品 150µl的5 號標準品加入150µl標準品稀釋液
3µg/L 3 號標準品 150µl的4 號標準品加入150µl標準品稀釋液
1.5µg/L 2 號標準品 150µl的3 號標準品加入150µl標準品稀釋液
0.75µg/L 1 號標準品 150µl的2 號標準品加入150µl標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同） ,、標準孔,、
待測樣品孔。 在酶標包被板上標準品準確加樣50µl， 待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,，然后再加待測樣品10µl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡
量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘,。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置 30 秒后棄去，如此
重復(fù) 5次,，拍干,。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50µl，空白孔除外,。
7. 溫育：操作同3,。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50µl,，再加入顯色劑B50µl,，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止：每孔加終止液 50µl,，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色） ,。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值） ,。 測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進行,。
大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒注意事項
1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未
用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。
2．濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果,。
3．各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差,。一次加樣時間
控制在5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣,。
4． 請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD 值
大于標準品孔*孔的OD 值） ,，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計
算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5） 。
5． 封板膜只限一次性使用,，以避免交叉污染,。
6．底物請避光保存。
7．嚴格按照說明書的操作進行,，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.
8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9．本試劑不同批號組分不得混用,。
10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準。
保存條件及有效期
1．大鼠Ⅱ型膠原（Col Ⅱ）試劑盒保存： ,；2-8℃,。
2．有效期：6個月