化工儀器網(wǎng)
技術(shù)文章
關(guān)于免疫組化,這里或許有您想問的
閱讀：1350 發(fā)布時(shí)間：2021-2-23免疫組化,，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,，通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑（熒光素,、酶,、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)）,，對其進(jìn)行定位,、定性及定量的研究，稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)(immunocytochemistry),。今天上海恒遠(yuǎn)為大家整理了一些一些免疫組化的常見問題,，下面我們來看看吧！
1.在什么情況下使用TritonX-100,？
(1)Triton X-100 化學(xué)名稱為聚乙二醇辛基苯基醚,，是一種去污劑,。在免疫組織化學(xué)(>10um 厚切片)和免疫細(xì)胞化學(xué)中一般用Triton X-100作為細(xì)胞通透劑，在膜上打孔,。
(2)其作用原理：Triton X-100可以溶解細(xì)胞膜,、細(xì)胞核膜、細(xì)胞器膜上的脂質(zhì)而使抗體及大分子結(jié)構(gòu)的物質(zhì)進(jìn)入胞漿和胞核內(nèi),，故在細(xì)胞免疫組化時(shí)尤為推薦使用,，這樣抗體就能順利進(jìn)入胞內(nèi)與相應(yīng)抗原結(jié)合。
(3)Triton X-100既是一種表面活性劑,，也有抗氧化作用
2.封閉血清的選擇原則是什么,？
(1)膜上或切片上有剩余的位點(diǎn)可以非特異性吸附抗體，造成后續(xù)結(jié)果的假陽性,！(2)封閉血清一般是和二抗同一來源的,，血清中動(dòng)物自身的抗體，預(yù)先能和組織中有交叉反應(yīng)的位點(diǎn)發(fā)生結(jié)合,，否則在后面的步驟中如果和二抗發(fā)生結(jié)合,，會(huì)造成背景。(3)也可以用小牛血清,、BSA,、羊血清等，但不能與一抗來源一致,。
3.抗體孵育條件的比較,？
(1)一抗孵育溫度有幾種：4度、室溫,、37度,，其中4度效果比較好；孵育時(shí)間：這與溫度,、抗體濃度有關(guān),，一般 37 度 1-2 h，而4度夜和從冰箱拿出后 37 度復(fù)溫 45 min,。(2)二抗一般室溫或 37 度 30 min-1 h,，具體時(shí)間需要摸索。
4.一抗 4 度孵育后為什么要進(jìn)行 37 度復(fù)溫,？
(1)一方面,，防止切片從 4 度直接放入 PBS 易脫片；(2)另一方面,，使抗原抗體結(jié)合更穩(wěn)定。一般不需要, 但對表達(dá)較弱的抗原可能有用,4 度和 37 度時(shí)分子運(yùn)動(dòng)方式不同, 前者分子碰撞機(jī)率和運(yùn)動(dòng)速度小于后者, 后者結(jié)合更快, 但敏感性也提高了并易造成非特異染色,。(3)其實(shí),，我更贊同后一種說法,，因?yàn)槲覈L試把肝臟片子從 4 度夜拿出后,，直接用 PBS 洗沒發(fā)生過脫片現(xiàn)象,。事實(shí)勝于雄辯！
上海恒遠(yuǎn)銷售多種化學(xué)品,、生命科學(xué)研發(fā)用試劑和實(shí)驗(yàn)室常規(guī)試劑等,，涵蓋各地高等院校、研究所,、生命科學(xué)和材料科學(xué)等基礎(chǔ)創(chuàng)新領(lǐng)域,，助力客戶的研究計(jì)劃，不斷進(jìn)取,，掌控新科學(xué)技術(shù),，為廣大客戶提供一站式服務(wù)并成為您可信賴的合作伙伴。