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如何做好ELISA實(shí)驗(yàn)?
閱讀：1056 發(fā)布時(shí)間：2021-1-29在生產(chǎn)過程中,，不同批次的試劑的質(zhì)量,，保證*一致非常困難，ELISA試劑盒甚至通過批檢驗(yàn)項(xiàng)目和結(jié)果也不同,，因此必須選擇和訂購試劑長批次,，并確保小鼠ELISA試劑盒保存條件。嚴(yán)格執(zhí)行本標(biāo)準(zhǔn)可以避免因試劑批號變化與質(zhì)量控制系統(tǒng)和復(fù)雜的過程,，重新評價(jià)試劑重新建立,，并能保證結(jié)果的穩(wěn)定性；有效期短,，使用率低的試劑,，應(yīng)小包裝，包裝,，可每次都是采取,，以避免重復(fù)凍融破壞試劑引起的,。
在Elisa試劑盒的使用過程中常見問題有很多如， 加樣器不確,；尤其10ul以下的加樣器,，對結(jié)果影響很大； 保溫設(shè)備不良,； 洗滌用水不規(guī)范,。
如何解決這些問題呢：
1在使用過程校正加樣器；10ul以下加樣器采用進(jìn)口產(chǎn)品（芬蘭,、法國等）,；
2 仔細(xì)校正溫度到37℃，水浴箱為佳,；
3 必須使用去離子水或蒸餾水,，不得用自來水、礦泉水等,；
4 認(rèn)真閱讀使用說明書,。
樣品加樣：
1 加樣不準(zhǔn)確； 2 沒有混勻,。 加樣時(shí)一定要仔細(xì),。加樣后，再檢查,，以防漏加,、錯(cuò)加。
2 加樣后,，反復(fù)抽吸3次混勻,，防止血清聚集孔底，導(dǎo)致非特異性吸附,。 洗滌 洗滌不* ①每次注水洗滌,，應(yīng)靜止30秒鐘；②選用吸水紙作為襯墊,，每次洗滌后扣干孔內(nèi)水分,；
3 可選用塑料洗滌瓶。 加酶反應(yīng) 漏加 滴加后,，認(rèn)真檢查各孔 結(jié)果判斷 ①包括陰性對照孔在內(nèi),，各孔顯色普遍偏深；②包括陽性對照在內(nèi),，各孔均無顯色；③陽性對照不顯色,，而其它樣本顯色正常,；
4 有些標(biāo)本顯色不深,，判斷陽性困難。 ①可能是洗滌不充分,；加樣過量,；溫育時(shí)間過長溫度過高；按說明書重新操作,。如無改善,， 可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；②可能是漏加樣本或酶液,；溫育時(shí)間過短溫度過低,；試劑保存不當(dāng)活性下降；按說明書重新 操作,。如無改善,，可與生產(chǎn)廠家聯(lián)系；③陽性對照漏加,、錯(cuò)加或失效,。重新操作。如無改善,，可與廠家聯(lián)系,，索要對照品； ④重新操作,。使用酶標(biāo)儀,，測定光吸收度，按P/N值標(biāo)準(zhǔn)判斷,。 ELISA試劑盒保存 保存不規(guī)范 一定要在2-8℃存放,。不得過高，也不得凍存（凍存后,，酶液將失效）,。 對照品 對照品為凍干品 按對照管標(biāo)示，加入相應(yīng)體積的去離子水或蒸餾水復(fù)溶,，充分溶解混勻,。可按說明書使用,。
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