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    1,、取5×TBE緩沖液20ml加水至200ml,，配制成0.5×TBE稀釋緩沖液,，待用。

    2,、膠液的制備：稱取0.4g瓊脂糖,，置于200ml錐形瓶中,，加入50ml 0.5×TBE稀釋緩沖液，放入微波爐里(或電爐上)加熱至瓊脂糖全部熔化,，取出搖勻,，此為0.8%瓊脂糖凝膠液。加熱過程中要不時搖動,，使附于瓶壁上的瓊脂糖顆粒進入溶液,。加熱時應(yīng)蓋上封口膜，以減少水份蒸發(fā),。

    3,、膠板的制備：將有機玻璃膠槽兩端分別用橡皮膏(寬約1cm)緊密封住。將封好的膠槽置于水平支持物上,，插上樣品梳子,，注意觀察梳子齒下緣應(yīng)與膠槽底面保持1mm左右的間隙。

    向冷卻至50-60℃的瓊脂糖膠液中加入溴化乙錠(EB)溶液使其終濃度為0.5μg /ml(也可不把EB加入凝膠中,，而是電泳后再用0.5μg/ml的EB溶液浸泡染色),。用移液器吸取少量融化的瓊脂糖凝膠封橡皮膏內(nèi)側(cè)，待瓊脂糖溶液凝固后將剩余的瓊脂糖小心地倒入膠槽內(nèi),，使膠液形成均勻的膠層,。倒膠時的溫度不可太低，否則凝固不均勻,，速度也不可太快,，否則容易出現(xiàn)氣泡。待膠*凝固后撥出梳子,，注意不要損傷梳底部的凝膠,，然后向槽內(nèi)加入0.5×TBE稀釋緩沖液至液面恰好沒過膠板上表面。因邊緣效應(yīng)樣品槽附近會有一些隆起,，阻礙緩沖液進入樣品槽中,，所以要注意保證樣品槽中應(yīng)注滿緩沖液。

    4,、加樣：取10μl酶解液與2μl 6×載樣液混勻,，用微量移液槍小心加入樣品槽中。若DNA含量偏低,，則可依上述比例增加上樣量,，但總體積不可超過樣品槽容量。每加完一個樣品要更換tip頭,，以防止互相污染,，注意上樣時要小心操作，避免損壞凝膠或?qū)悠凡鄣撞磕z刺穿。

    5,、電泳：加完樣后,，合上電泳槽蓋，立即接通電源,?？刂齐妷罕３衷?0-80V，電流在40mA以上,。當(dāng)溴酚藍(lán)條帶移動到距凝膠前沿約2cm時,，停止電泳。

    6,、染色：未加EB的膠板在電泳完畢后移入0.5μg/ml的EB溶液中,，室溫下染色20-25分鐘。

    7,、觀察和拍照：在波長為254nm的長波長紫外燈下觀察染色后的或已加有EB的電泳膠板,。DNA存在處顯示出肉眼可辨的桔紅色熒光條帶。紫光燈下觀察時應(yīng)戴上防護眼鏡或有機玻璃面罩,，以免損傷眼睛,。 經(jīng)照相機鏡頭加上近攝鏡片和紅色濾光片后將相機固定于照相架上，采用全色膠片,，光圈5.6,，曝光時間10-120秒(根據(jù)熒光條帶的深淺選擇)。

    8,、DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：在放大的電泳照片上,，以樣品槽為起點，用卡尺測量λDNA的EcoRⅠ和HindⅢ酶切片段的遷移距離,，以厘米為單位,。以核苷酸數(shù)的常用對數(shù)為縱坐標(biāo)，以遷移距離為橫坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出連結(jié)各點的平滑曲線,，即為該電泳條件下DNA分子量的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

    9,、DNA酶切片段大小的測定：在放大的電泳照片上,，用卡尺量出DNA樣品各片段的遷移距離，根據(jù)此數(shù)值,，在DNA分子量標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的對數(shù)值,，進一步計算出各片段的分子量大小(若用單對數(shù)坐標(biāo)紙來繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，則可根據(jù)遷移距離直接查出DNA片段的大小),。反之，若已知DNA片段的大小亦可由標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出它預(yù)計的遷移距離,。

    10,、DNA酶切片段排列順序的確定：根據(jù)單酶切,，雙酶切和多酶切的電泳分析結(jié)果，對照DNA酶切片段大小的數(shù)據(jù)進行邏輯推理,，然后確定各酶切片段的排列順序和各酶切位點的相對位置,。以環(huán)狀圖或直線圖表示，即成該DNA分子的限制性內(nèi)切酶圖譜,。