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血清學(xué)試驗
閱讀：1370 發(fā)布時間：2020-1-9血清學(xué)反應(yīng)是指：相應(yīng)的抗原與抗體在體外一定條件下作用，可出現(xiàn)肉眼可見的沉淀、凝集現(xiàn)象,。在食品微生物檢驗中，常用血清學(xué)反應(yīng)來鑒定分離到的細菌,，以zui終確認檢測結(jié)果,。
血清學(xué)反應(yīng)的一般特點：
1） 抗原體的結(jié)合具有特異性，當有共同抗原體存在時,，會出現(xiàn)交叉反應(yīng),。
2） 抗原體的結(jié)合是分子表面的結(jié)合,，這種結(jié)合雖相當穩(wěn)定，但是可逆的,。
3） 抗原體的結(jié)合是按一定比例進行的,，只有比例適當時，才能出現(xiàn)可見反應(yīng),。
4） 血清學(xué)反應(yīng)大體分為兩個階段進行,，但其間無嚴格界限。*階段為抗原體特異性結(jié)合階段,，反應(yīng)速度很快,，只需幾秒至幾分鐘反應(yīng)即可完畢，但不出現(xiàn)肉眼可見現(xiàn)象,。第二階段為抗原體反應(yīng)的可見階段,，表現(xiàn)為凝集、沉淀,、補體結(jié)合反應(yīng)等,。反應(yīng)速度慢，需幾分,、幾十分以至更長時間,。而且，在第二階段反應(yīng)中,，電解質(zhì),、PH、溫度等環(huán)境因素的變化,，都直接影響血清學(xué)反應(yīng)的結(jié)果,。
習(xí)慣上將經(jīng)典的血清學(xué)反應(yīng)分三種類別：凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)和補體結(jié)合反應(yīng),。
1,、凝集反應(yīng)
顆粒性抗原（細菌、紅細胞等）與相應(yīng)抗體結(jié)合,，在電解質(zhì)參與下所形成的肉眼可見的凝集現(xiàn)象,，稱為凝集反應(yīng)（Agglutination reaction）。其中的抗原稱為凝集原,，抗體稱為凝集素,。在該反應(yīng)中，因為單位體積抗體量大,，做定量實驗時,，應(yīng)稀釋抗體。
1） 直接凝集反應(yīng)
顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合所出現(xiàn)的反應(yīng)，稱為直接凝集反應(yīng)（Direct agglution reaction）,。
a.玻片凝集法,。是一種常規(guī)的定性試驗方法。原理是用已知抗體來檢測未知抗原,。常用于鑒定菌種,、血型。如將含有痢疾桿菌抗體的血清與待檢菌液各一滴,，在玻片上混勻,，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即陽性反應(yīng),，證明該菌是痢疾桿菌,。此法快速、簡便,，但不能進行定量測定,。
b.試管凝集法。是一種定量試驗方法,。多用已知抗原來檢測血清中有無相應(yīng)抗體及其含量,。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達氏反應(yīng)就是診斷傷寒,、付傷寒的試管凝集試驗,。因為要測定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度,，然后加入等量抗原，37℃或56℃,，2~4小時觀察,，血清zui高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價,。
2） 間接凝集反應(yīng)
將可溶性抗原（抗體）先吸附在一種與免疫無關(guān)的,，顆粒狀微球表面，然后與相應(yīng)抗體（抗原）作用,，在有電解質(zhì)存在的條件下,，即可發(fā)生凝集，稱為間接凝集反應(yīng)（Indirect agglutination）,。由于載體增大了可溶性抗原的反應(yīng)面積,。當載體上有少量抗原與抗體結(jié)合。就出現(xiàn)肉眼可見的反應(yīng),，敏感性很高,。
2、沉淀反應(yīng)
可溶性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在有適量電解質(zhì)存在下,，經(jīng)過一定時間,，形成肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應(yīng)（Precipitation）,。反應(yīng)中的抗原稱為沉淀原,，抗體為沉淀素。由于在單位體積內(nèi)抗原量大,，為了不使抗原過剩,，故應(yīng)稀釋抗原，并以抗原的稀釋度作為沉淀反應(yīng)的效價,。
1） 環(huán)狀沉淀反應(yīng)：是一種定性試驗方法,，可用已知抗體檢測未知抗原。將已知抗體注入特制小試管中,，然后沿管壁徐徐加入等量抗原,，如抗原與抗體對應(yīng)，則在兩液界面出現(xiàn)白色的沉淀圓環(huán),。
2） 絮狀沉淀反應(yīng)：將已知抗原與抗體在試管（如凹玻片）內(nèi)混勻,，如抗原抗體對應(yīng)，而又二者比例適當時,，會出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀,，此為陽性反應(yīng)。
3） 瓊脂擴散試驗：利用可溶性抗原抗體在半固體瓊脂內(nèi)擴散,，若抗原抗體對應(yīng),，且二者比例合適，在其擴散的某一部分就會出現(xiàn)白色的沉淀線,。每對抗原抗體可形成一條沉淀線,。有幾對抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線,。瓊脂擴散可分為單向擴散和雙向擴散兩種類型,。單向擴散是一種定量試驗?？捎糜诿庖叩鞍缀康臏y定,。而雙向擴散多用于定性試驗。由于方法簡便易行,，常用于測定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分,。
3、補體結(jié)合反應(yīng)
補體結(jié)合反應(yīng)（Complement fixation reaction）是在補體參與下,，以綿羊紅細胞和溶血素作為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng),。補體無特異性,，能與任何一組抗原抗體復(fù)合物結(jié)合而引起反應(yīng)。如果補體與綿羊紅細胞,、溶血素的復(fù)合物結(jié)合,，就會出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如果與細菌及相應(yīng)抗體復(fù)合物結(jié)合,，就會出現(xiàn)溶菌現(xiàn)象,。因此，整個試驗需要有補體,、待檢系統(tǒng)（已知抗體或抗原,、未知抗原或抗體）及指示系統(tǒng)（綿羊細胞和溶血素）五種成份參加。其試驗原理是補體不單獨和抗原或抗體結(jié)合,。如果出現(xiàn)溶菌,，是補體與待檢系統(tǒng)結(jié)合的結(jié)果，說明抗原抗體是相對應(yīng)的,，如果出現(xiàn)溶血,，說明抗原抗體不相對應(yīng)。此反應(yīng)操作復(fù)雜,，敏感性高,，特異性強，能測出少量抗原和抗體,，所以應(yīng)用范圍較廣,。