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    在免疫酶技術(shù)中,，首先要確定的變異因素就是酶標(biāo)記物的工作濃度。因?yàn)槊笜?biāo)記物濃度的很小變化,，便可導(dǎo)致試驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生很大的波動(dòng),。另外，由于濃度過(guò)高,，可使非特異性反應(yīng)增加,，而濃度過(guò)低又可影響測(cè)定的敏感性。因此,，正式試驗(yàn)前必須準(zhǔn)確滴定其工作濃度,。

    1.酶標(biāo)記抗體的滴定方法是：將抗原（或抗體）物理吸附于固相載體上，然后將經(jīng)過(guò)一系列稀釋的酶標(biāo)抗體（或抗Ig抗體）與吸附在載體上的抗原（或抗體）起反應(yīng),，以酶與底物的顯色反應(yīng)程度來(lái)確定酶標(biāo)記抗體的效價(jià),，或稱工作濃度。

    2.其步驟為：先將抗原（或抗體）用0.05M PH9.6包被緩沖液稀釋為10μg/ml左右,，于聚苯乙烯板孔內(nèi)加0.1ml,，4℃一夜，次日以洗滌緩沖液洗滌3次,。酶標(biāo)記抗體用1%BSA-PBS液依次稀釋成1:100,，1:200，1:400，1:800,，1:1600（根據(jù)據(jù)抗體的滴度而定）,，分別加入反應(yīng)孔中，每個(gè)稀釋度二孔,，每孔0.1ml,，37℃孵育1小時(shí)后洗滌。然后加底物液,，每孔0.1ml,，37℃10～30分鐘。以2M H２SO4 0.05ml終止反應(yīng),。

    3.結(jié)果判定主要以ELISA比色儀讀取各孔OD值,，并以O(shè)D為縱座標(biāo)，結(jié)合物濃度為橫座標(biāo),，繪制滴定曲線,。由曲線上查得OD值為1.0左右，且曲線斜率zui大時(shí)的酶標(biāo)抗體稀釋度,，即為該標(biāo)記物的工作濃度,。