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科研血清存在的一些常見問題!
閱讀：1077 發(fā)布時間：2018-12-25科研血清是指血液凝固后,，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋白已被除去的血漿,。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì),、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白,、提供促接觸和伸展因子使細胞貼壁免受機械損傷,、對培養(yǎng)中的細胞的起到某些保護作用,。
科研血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知,，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別,、年齡,、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異,。血清是血漿中不含纖維蛋白原的膠狀液體,具有維持血液的正常粘度、酸堿度,、滲透壓等作用。它主要由水和各種化學(xué)成分組成,這些化學(xué)成分包括白蛋白,、α1、α2,、β、γ-球蛋白,甘油三酯,總膽固醇,谷丙轉(zhuǎn)氨酶等,。血清中含有各種血漿蛋白,、多肽、脂肪,、碳水化合物、生長因子,、激素,、無機物等，這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的,。對科研血清的成分和作用的研究雖有很大進展，但仍存在一些問題,，主要是:
*:血清的成份可能有幾百種之多,，對其準(zhǔn)確的成份,、含量及其作用機制仍不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子,、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識,，這給研究工作帶來許多困難;
第二:血清都是批量生產(chǎn),，各批量之間差異很大,，而且血清保存期至多一年，因此,，要保證每批血清的相似性極為困難,，從而使實驗的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制;
第三:不能排除血清中含有易變物質(zhì)，這被認(rèn)為是"瓶中惡化"的原因之一,。
問題一：如何解凍血清才不會使產(chǎn)品品質(zhì)受損？
答：我們建議您將血清從冷凍箱取出后,，先置于2～8℃冰箱使之融解,，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,，融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻,。
問題二：保存血清hao的方法是怎樣的呢？
答：我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-2O℃,。然而,，若存放于4℃時，請勿超過一個月,。若您一次無法用完一瓶,，建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi)，再放回冷凍,。
問題三：為什么要熱滅活科研血清,？
答：加熱可以滅活補體系統(tǒng),。啟動的補體參與溶解細胞事件,，刺激平滑肌收縮,，細胞和血小板釋放組胺,，啟動淋巴細胞和巨噬細胞,。在免疫學(xué)研究，培養(yǎng)ES細胞,，昆蟲細胞和平滑肌細胞時,，推薦使用熱滅活血清。
問題四：有必要做熱滅活嗎?
答：實驗顯示,，經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,，對大多數(shù)的細胞而言是不需要的,。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用,，甚至通常因為高溫處理影響了血清的品質(zhì),，而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,，沉淀物的形成會顯著的增多,，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”,，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,，而把血清放在37 ℃環(huán)境中，又會使此沉淀物更增多,，使研究者誤認(rèn)為是微生物的擴增,。 因此我們建議您，若非必須,，您可以不需要做熱處理這一步,。如此一來,，不但節(jié)省您寶貴的時間，更確保血清的品質(zhì)!
問題五：血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),，該如何處理?
答：血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因，但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,，血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,，也會存在于血清中,，亦是造成沉淀物的主要原因之一,。但這些絮狀沉淀物,，并不影響血清本身的品質(zhì)。 若您欲去除這些絮狀沉淀物,，可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),，以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,，因為它可能會阻塞您的過濾膜,。
問題六：為什么儲存在冰箱中的血清會出現(xiàn)沉淀,？
答：我們的胎牛血清沒有預(yù)老化,，儲存在2－8℃時,，血清中的各種蛋白和脂蛋白（如冷凝集素、纖維蛋白原,、玻粘連蛋白等）可能聚集而形成沉淀或可見的混濁,。這應(yīng)該不會影響血清的品質(zhì)。推薦在－20℃儲存胎牛血清,，避免反復(fù)凍融,。