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細(xì)胞培養(yǎng)在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中污染的原因
閱讀:1468 發(fā)布時(shí)間:2018-12-10污染是細(xì)胞培養(yǎng)的大敵。預(yù)防和避免污染是細(xì)胞培養(yǎng)成功的關(guān)鍵之一,。一開始就要十分重視,,防止污染,否則會(huì)前功盡棄,,不僅浪費(fèi)時(shí)間,,而且浪費(fèi)人力、物力,,甚至造成無(wú)法彌補(bǔ)的損失,。 細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有 7 種,分別是細(xì)菌污染,、支原體污染,、原蟲污染、黑膠蟲污染,、真菌污染,、病毒污染以及非細(xì)胞污染。他們?cè)诩?xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下:
1. 細(xì)菌:細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃,,對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯,。
2. 支原體:黑色的,好象多為多形,,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁,,原體感染,國(guó)內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè),,而支原體是牛血清中常見的微生物之一,。而且它不能用過(guò)濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后,,細(xì)胞病變不很明顯,,只是慢慢死qu,。
3. 黑膠蟲:可以穿透濾膜,也可以通過(guò)空氣傳播,,低倍下為黑色點(diǎn)狀,,高倍下可看見黑色的小蟲游來(lái)游去,培養(yǎng)液也是不渾的,,一般不會(huì)太影響,,細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好,,且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無(wú)明顯增多,,且培養(yǎng)液顏色、透明度無(wú)明顯變化,,可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象,。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響,在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失,,除更換血清外無(wú)須特殊處理,。
4. 真菌:一般培養(yǎng)液清亮,不變色,,鏡下有絲狀物,,有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片,只是它很多很多的小塊很清楚,,象珊瑚狀,,不象細(xì)胞碎片分不清,慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物,。真菌生長(zhǎng)的比較慢,,不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn),但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了,,也很難救活了,。
5. 原蟲:培養(yǎng)液可輕微渾濁,顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多,,輕微活動(dòng),,細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢,而且細(xì)胞狀態(tài)不好,,邊緣不清楚,,細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng),。這種共生是非常普遍的,,但他們的數(shù)量小,細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng),只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng),,終形成惡性循環(huán),。
6. 病毒:組織細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,如果沒有除去潛在的病毒,,就會(huì)產(chǎn)生病毒污染。目前,,從原代猴腎細(xì)胞的培養(yǎng)中已發(fā)現(xiàn)不少于 20 種血清性病毒,。 盡管病毒污染的細(xì)胞不影響原代培養(yǎng),但生產(chǎn)疫苗是不安全的,。因此,,潛在病毒是細(xì)胞大量生產(chǎn)和疫苗、干擾素等生物制品制作中的難題
7. 非同種細(xì)胞污染 :即是細(xì)胞交叉污染,,由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時(shí)各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開,,往往會(huì)使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染。目前,,世界上已有幾十種細(xì)胞都被 HeLa 細(xì)胞所污染,,致使許多實(shí)驗(yàn)宣告無(wú)效。非細(xì)胞培養(yǎng)物所造成的化學(xué)成分的污染也偶有發(fā)生,,大多是由于細(xì)胞培養(yǎng)所需物品清洗消毒不*而帶入一些有毒化學(xué)物質(zhì)所致,。 在上述的八種污染物中,黑膠蟲是現(xiàn)代細(xì)胞培養(yǎng)中討論比較多的,,但大多數(shù)文獻(xiàn)未對(duì)其進(jìn)行描述或一帶而過(guò),就像上面關(guān)于描述黑膠蟲的情況是不完整,,還有很多不明的情況,。對(duì)其身份有多種猜測(cè),到現(xiàn)在都沒有地對(duì)黑膠蟲進(jìn)行分類學(xué)上的歸類,。黑膠蟲到底是不是一種生物,,如果是那黑膠蟲會(huì)是何種生物,如果不是,,那黑膠蟲會(huì)是什么,?一系列的問(wèn)題都懸在奮斗在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域的學(xué)者們的心中。