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雞ELISA試劑盒試驗(yàn)注意事項(xiàng)有哪些?
閱讀:970 發(fā)布時(shí)間:2018-12-4或許,,人生的每一次蛻變,都是觸目驚心的,。曾經(jīng),,我認(rèn)為有些河流,我永遠(yuǎn)趟不過去,,有些山峰,,我永遠(yuǎn)不能翻越。不曾想,,自己竟然是如此的勇敢,。或許,,人生有太多或許了,,上海恒遠(yuǎn)的小編帶您了解雞ELISA試劑盒試驗(yàn)注意事項(xiàng)有哪些?
在ELISA實(shí)驗(yàn)前的注意事項(xiàng)
1,、仔細(xì)閱讀說明書
2,、確定試劑盒在有效期內(nèi)
3、按說明書確定所有試劑齊全(數(shù)量,、體積)
4,、標(biāo)本制備要規(guī)范,每份標(biāo)本體積要按2-3個(gè)復(fù)孔以上的量制備(貯存),盡量分裝做備份,。短期內(nèi)無法實(shí)驗(yàn)者,,注意低溫保存
5、準(zhǔn)備好所有實(shí)驗(yàn)額外所需物品,,如試管,、吸頭、移液器,、離心機(jī)等
6,、根據(jù)檢測(cè)標(biāo)本數(shù)量確定所需試劑的量
7、按說明書將所用試劑平衡至室溫,,配制所需試劑
ELISA試驗(yàn)時(shí),,注意事項(xiàng)如下:
1.正式試驗(yàn)時(shí),應(yīng)分別以陽性對(duì)照與陰性對(duì)照控制試驗(yàn)條件,,待檢樣品應(yīng)作一式二份,,以保證實(shí)驗(yàn)
結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時(shí)本底較高,,說明有非特異性反應(yīng),,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉,。
2.在ELISA中,,進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1)固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,,如聚氯乙烯,、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等,。其形式可以是凹孔平板,、試管、珠粒等,。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板,。不管何種載體,,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,,在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,,據(jù)此判明其吸附性能是否良好,。
(2)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí),要求純度要好,吸附時(shí)一般要求PH在9.0~9.6之間,。吸附溫度,,時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1,、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,,在其它試驗(yàn)條件相同時(shí),,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度,。對(duì)于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml,。
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