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   在ELISA中除了包被外,，一般需進行4－5次加樣,。在定性測定中有時不強調(diào)加樣量的準確性,，例如規(guī)定為加樣一滴。此時應(yīng)該使用相同口徑的滴管,，保持準確的加樣姿勢,，使每滴液體的體積基本相同。在定量測定中則加樣量應(yīng)力求準確,。標本和結(jié)合物的稀釋液應(yīng)按規(guī)定配制,。加樣時應(yīng)將液體加在孔底，避免加在孔壁上部,，并注意不可出現(xiàn)氣泡,。

 ELISA中加樣須注意如下問題：

1. 吸取樣品時，加樣槍吸頭不應(yīng)黏附多余的液體,；加樣時不可90度向孔中滴加液體，這樣會導(dǎo)致液體殘留在吸頭上,，加樣不準確,！

2. 不要將吸頭伸入孔中，一方面若接觸孔底可能壓彎吸頭,，另一方面可能會將孔中的液體吹起來,，加樣不準確！

正確的加樣方法應(yīng)為45度,，吸頭貼著孔壁加入,，應(yīng)注意：

1. 角度太小，會使液體殘留在孔壁上,，導(dǎo)致加樣不準確,！

2. 吸頭應(yīng)當貼著管壁和液面的交界處

   使用微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點是：加樣不可太快，要避免加在孔壁上部,，不可濺出和產(chǎn)生氣泡,。加樣太快，無法保證微量加樣的準確性和均一性,。加在孔壁上部的非包被區(qū),，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會對鄰近孔產(chǎn)生污染,。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異,。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加，除了要注意滴加的角度外,，滴加的速度也很重要,，滴加太快，很容易出現(xiàn)重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,，這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)出現(xiàn)非特異吸附,，從而引起非特異顯色。所以，有時候一份標本用相同的試劑盒這次測定為陽性,，下次測定為陰性,，往往就是上述加樣及試劑的錯誤所致.

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