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ELISA這個檢測方法的原理,，大家都很清楚,，網上的資料一大堆?？烧嬲闷饋淼臅r候,，有時候就有點犯糊涂，今天上海恒遠就與您分析一下如何靈活應用ELISA這個檢測方法?
一,、雙抗體夾心法：
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1～10μg/ml,。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml，4℃ 過夜,。次日,，棄去孔內溶液，用洗滌緩沖液洗3次,，每次3分鐘,。（簡稱洗滌，下同）,。
2. 加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,，置37℃ 孵育1小時。然后洗滌,。（同時做空白孔,，陰性對照孔及陽性對照孔）。
3. 加酶標抗體：于各反應孔中,，加入新鮮稀釋的酶標抗體（經滴定后的稀釋度）0.1ml,。37℃ 孵育0.5～1小時，洗滌,。
4. 加底物液顯色：于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,，37℃ 10～30分鐘。
5. 終止反應：于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml,。
6. 結果判定：可于白色背景上,，直接用肉眼觀察結果：反應孔內顏色越深，陽性程度越強,，陰性反應為無色或極淺,，依據所呈顏色的深淺，以“+”,、“-”號表示,。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm（若以ABTS顯色,，則410nm）處,，以空白對照孔調零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,，即為陽性,。
二,、間接法：
1.用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml,，4℃過夜,；
2.次日洗滌3次；
3.加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌,；
4.（同時做空白,、陰性及陽性孔對照）于反應孔中，加入新鮮稀釋的酶標第二抗體（抗抗體）0.1ml,；
5.37℃孵育35-60分鐘,，洗滌；
6.zui后一遍用DDW洗滌,。
  以上ELISA試劑盒的檢測方法您都掌握好了嗎,？如有疑問歡迎您的。另外,，上海恒遠生物科技有限公司主營：Elisa試劑盒,人Elisa試劑盒,大鼠Elisa試劑盒,小鼠Elisa試劑盒,生物試劑,血清,抗體,培養(yǎng)基,標準品,國產血清,、GIBCO胎牛血清等。種屬齊全,，*,。期待您的合作！