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    ELISA試驗(yàn)以操作簡(jiǎn)單,、靈敏度較高,、特異性較好的特點(diǎn)在科研領(lǐng)域上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果都有影響,操作不當(dāng)將引起較大的誤差,。下面給大家簡(jiǎn)單的講解一下步驟中的影響因素及解決辦法,。

加樣
可能原因：1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2.手工操作中,，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)),； 3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。

解決辦法：1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后,，再用3000rmp離心15分鐘,；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次,，放置一段時(shí)間后,，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè),，可放在2-8℃冰箱中,，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi),。 2.加樣后及時(shí)放入孵箱,。 3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣,，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑,。 5.標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作,。

溫育
可能原因：1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋,，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁,，難于清洗*； 2.孵育時(shí)間人為延長(zhǎng),，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍,，難以清洗*。

解決辦法：1.貼封片或加蓋,； 2.按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間,。
洗滌
可能原因：1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí),，洗液量不足,，導(dǎo)致洗板不*,；洗板針堵塞，抽吸不*,；洗板不暢,，導(dǎo)致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng),。

解決辦法：1.保證洗液注滿各孔,，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈,、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干,； 2.合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī),。

顯色
可能原因：1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑,； 2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。
解決辦法：1. 顯色劑盡量在臨用前配制,，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑,，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流,； 3.A,、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。

終止
可能原因：加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡,，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加,。
解決辦法：加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。

讀板
可能原因：讀板時(shí)板底不清潔,。
解決辦法：應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔,。

上海恒遠(yuǎn)溫馨提醒：整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸。選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑,，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。