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ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測定）是一種快速、靈敏,、準確可靠的一種定量分析方法,，樣本的處理對于ELISA實驗的成功有著舉足輕重的作用。 利用ELISA進行檢測的樣本類型包括常見的血液（血清,、血漿）,，組織勻漿、細胞裂解液,、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織,、尿液、糞便,、肺泡灌洗液,、唾液、腦脊液,、胸腹水,、前列腺液、精液,、陰道分泌物等,，這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結果,。下面就常見ELISA細胞處理方法的整理,，希望對您有所幫助。

細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本,。 需要注意的是： 因該類樣本干擾因素較多,， 如細胞狀態(tài)、 細胞數(shù)量(大于 10^6),、ph(約為 7),、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等,，所以可能存在檢測不出的情況,。

如果目的物是分泌型，主要在胞外,，即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本,，如果目的物主要存在于胞內(nèi)，則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型,。細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單,，取細胞培養(yǎng)上清，1000×g 離心 20 分鐘,，取上清即可檢測,。

細胞裂解液：

1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集） ,；

2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3次,；

3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融） ：

       ⇒ 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞,，用一定功率的超聲波處理細胞懸液,，使細胞急劇震蕩破裂；

       ⇒ 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 度以下冰凍,，室溫融解,，反復3次，使細胞溶脹破碎,；

4）將標本于2-8 度 1500×g 離心 10 分鐘,，收集上清備用。

一般情況下,，物理方法如反復凍融,，勻漿等方法會比化學方法好，因為化學方法會引入酸或堿,，可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響,。我們也做了相關實驗來評測化學提取液和洗滌劑對ELISA檢測的影響，如 RIPA,、TritonX-100,、NP-40和SDS、脫氧膽酸鈉,、β巰基乙醇,、DTT 和尿素。根據(jù)我們的質(zhì)檢結果,，高濃度的洗滌劑會影響ELISA檢測的zui終結果,。然而，其效果會洗滌劑濃度的降低而減少,。與其他化學裂解緩沖液相比,，1％的 Triton X-100 和 1％NP-40 對 ELISA檢測的影響較小。如果一定要用化學提取方法的話,，推薦用這兩種洗滌劑來提取靶蛋白,。利用化學的細胞裂解液裂解細胞，如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應影響檢測效果,，推薦利用透析和超濾的方法除去去污劑成分,。

處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,，由于蛋白容易變性，降解,，故該過程應盡量溫和,。樣本處理之后的儲存也非常重要，尤其注意不要反復凍融,，樣本處理之后可分裝密封保存,， 4 度保存應小于 1 周，-20 度不應超過 1 個月,，-80度不應超過2個月,。在標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解,。樣本的處理是實驗成功的*步, ,，以上就是關于常見樣本處理方法的一個簡述，供研究者參考,。