ELISA（酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定）是一種快速,、靈敏、準(zhǔn)確可靠的一種定量分析方法，樣本的處理對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)的成功有著舉足輕重的作用,。 利用ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見(jiàn)的血液（血清、血漿）,，組織勻漿,、細(xì)胞裂解液,、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見(jiàn)的皮膚組織,、尿液,、糞便,、肺泡灌洗液,、唾液,、腦脊液,、胸腹水、前列腺液,、精液、陰道分泌物等,，這些樣本收集的時(shí)間,、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,。下面就常見(jiàn)ELISA血液樣本處理方法的整理，希望對(duì)您有所幫助。
血液采取后應(yīng)盡快進(jìn)行處理,，使血清（漿）從與血細(xì)胞接觸的全血中分離出來(lái),。
血清與血漿的區(qū)別： 血清是血液凝固后缺少纖維蛋原的血漿,，故血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外,，其他成份均等同于血清。 選擇血清還是血漿樣本,？ 由于血清中缺乏很多的凝血因子,，但有一些凝血產(chǎn)物，如果是測(cè)凝血因子建議選擇血漿樣本,；同時(shí)血漿中有纖維蛋白原,，如果纖維蛋白原對(duì)待檢測(cè)指標(biāo)有影響，建議選擇血清樣本,。大多數(shù)情況下二者均可以選擇,。 處理方法： ♦ 血清：將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2 小時(shí)或 4 度隔夜，然后 1000×g 離心 20分鐘,，取上清即可,。這是一個(gè)讓血液自然凝固的過(guò)程，溫度溫度越低,，凝集越緩慢,，可根據(jù)需要添加促凝劑。 ♦ 血漿：血漿樣本需要抗凝,，一般建議用 2.0%EDTA,，1%肝素,，3.8%枸櫞酸鈉作為抗凝劑采集標(biāo)本，并將標(biāo)本在采集后的30 分鐘內(nèi)于2 ~8度 1000 g 離心15 分鐘,，取上清即可檢測(cè),。根據(jù)待檢測(cè)目標(biāo)物的性質(zhì)不同選取不同的抗凝劑。
處理樣本的過(guò)程就是收集目標(biāo)蛋白的過(guò)程,，由于蛋白容易變性,，降解,，故該過(guò)程應(yīng)盡量溫和,。樣本處理之后的儲(chǔ)存也非常重要,，尤其注意不要反復(fù)凍融,，樣本處理之后可分裝密封保存,， 4 度保存應(yīng)小于 1 周，-20 度不應(yīng)超過(guò) 1 個(gè)月,，-80度不應(yīng)超過(guò)2個(gè)月,。在標(biāo)本使用前應(yīng)緩慢均衡至室溫，不應(yīng)加熱使之融解,。樣本的處理是實(shí)驗(yàn)成功的*步, ,，以上就是關(guān)于常見(jiàn)樣本處理方法的一個(gè)簡(jiǎn)述,，供研究者參考,。
恒遠(yuǎn)提醒:
如果您選擇的
抗凝劑是 | 請(qǐng)注意 | |
枸櫞酸鈉
（檸檬酸鈉） | Ca2+有凝血作用,，枸櫞酸鈉能與血液中的鈣離子形成可溶性的螯合物，從而阻止血液凝固,。配成109mmol/L 的濃度和血液1:9,106mmol/L 的濃度和血液 1:4,。
缺點(diǎn)：血液中溶解度低,，抗凝作用較弱。
優(yōu)點(diǎn)：對(duì)凝血因子有很好的保護(hù)作用,，大部分凝血試驗(yàn)都可用枸櫞酸鈉抗凝。 | |
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乙二胺四乙酸（EDTA）鹽 | 與血液中的鈣離子結(jié)合形成配位化合物,，從而阻止血液凝固。15g/L EDTA和血液 1:10,。
優(yōu)點(diǎn)：對(duì)紅細(xì)胞和白細(xì)胞形態(tài)影響小,。
缺點(diǎn)：影響血小板的聚集,。不適用于凝血實(shí)驗(yàn)和血小板功能相關(guān)實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)。 | |
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肝素 | 通過(guò)與抗凝血酶Ⅲ結(jié)合,，增強(qiáng)抗凝血酶的作用,，滅活絲氨酸蛋白酶，從而可阻止凝血酶的形成和阻止血小板聚集,，阻止血液凝固,。肝素鈉 1g/L與血液 1:10。
優(yōu)點(diǎn)：抗凝能力強(qiáng),、不影響血細(xì)胞體積,、不易溶血、能耐高溫,。
缺點(diǎn)：引起白細(xì)胞聚集,。肝素抗凝血應(yīng)于短時(shí)間內(nèi)使用，否則放置過(guò)久血液又可凝固,。 | |
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