如何修|煉成流式高手 -方案設計(上)
我們時常會遇到,明明染色Marker都來自一篇文獻,,但是后實驗結果卻變成“買家秀與賣家秀”,。
產生這種現(xiàn)象的原因是什么?以及我們?yōu)槭裁匆绾蝺?yōu)化我們的染色方案呢,?我們先看具體的例子,。
方案1與方案2,所選擇的marker都*一致,,所選用的熒光素種類一樣,,但是搭配不一樣。那么我們看看同一個樣本,,后各個細胞亞群的結果一樣嗎,?
方案1與方案2,CD4+CD25+ 的百分比接近(A與C比較),,可是CD8+CD69+的百分比卻相差很多(C與D比較),。
造成這種原因其實就是我們平時說到到spreading現(xiàn)象。
Nguyen, Richard, et al. "Quantifying spillover spreading for comparing instrument performance and aiding in multicolor panel design." Cytometry Part A 83.3 (2013): 306-315.
如果要優(yōu)化流式染色方案中,,由spreading現(xiàn)象產生的分辨率降低,,我們可以使用SWOFF方法。通過如下流程,,就可以很快找出究竟是由于那個通道的配色不合理,,導致分辨能力下降。
在不同的檢測平臺,,元件的光電轉化效率會直接影響儀器總體分辨率,。
不僅如此,,科技的進步帶來的還有更小的spreading現(xiàn)象,這使得配色也更加的輕松,,結果也更加的準確,。
你想知道如何檢查自己的染色方案么?利用SWOFF的方法,,可以幫您發(fā)現(xiàn)并且優(yōu)化,,使檢測更加準確,。點擊下方閱讀全文,,獲取SWOFF的詳細步驟。