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貝克曼庫(kù)爾特超速流式細(xì)胞分選系統(tǒng)有哪些應(yīng)用
MoFlo XDP可運(yùn)對(duì)各種真核和原核細(xì)胞,、植物細(xì)胞、微生物,、浮游生物等進(jìn)行檢測(cè)及分選,。專(zhuān)為要求高產(chǎn)量,、生物安全性和需要便捷的軟件分析系統(tǒng)的研究者而設(shè)計(jì)。
一.稀有細(xì)胞應(yīng)用
標(biāo)記CFSE后通過(guò)尾靜脈移植入受者小鼠體內(nèi),,提取受者小鼠脾臟細(xì)胞進(jìn)行移植細(xì)胞檢測(cè),。總共檢測(cè)2293萬(wàn)個(gè)細(xì)胞,,發(fā)現(xiàn)移植細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行6代增殖,。R7,R8,,R9分別為第5,,第4,第3代移植細(xì)胞,,含量分別在萬(wàn)分之一左右,。含量約為1/10萬(wàn)的CD133陽(yáng)性細(xì)胞,分選后直接注射裸鼠皮下進(jìn)行成瘤實(shí)驗(yàn),。
二,、低含量,連續(xù)表達(dá)細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行高速四路分選
三,、腫瘤干細(xì)胞檢測(cè)
腫瘤干細(xì)胞通常缺乏特異性標(biāo)記,,含量又很低,,所以很難被檢測(cè)到,。腫瘤干細(xì)胞和普通腫瘤細(xì)胞相比,細(xì)胞膜含有有泵動(dòng)功能的ABC等蛋白家族,,是腫瘤耐藥和復(fù)發(fā)的決定性因素,,因此對(duì)腫瘤干細(xì)胞的研究具有重要意義。
利用其細(xì)胞膜的泵動(dòng)功能,,以小分子活性染料Hoechst33342對(duì)腫瘤樣本進(jìn)行平衡染色,,可以檢測(cè)到因?yàn)楸贸鯤oechst33342而著色較少的側(cè)群細(xì)胞(SP,Side Population),,此即為腫瘤干細(xì)胞,。利用泵蛋白抑制劑Verapami同時(shí)染色,可以看到側(cè)群細(xì)胞比例明顯減少或全部消失,,能確認(rèn)SP細(xì)胞的位置,。其它干細(xì)胞,如間充質(zhì)干細(xì)胞,、造血干細(xì)胞,、神經(jīng)干細(xì)胞、各種成體干細(xì)胞等都可以用這種方法來(lái)進(jìn)行篩選,。分選出SP細(xì)胞群和非SP細(xì)胞群,,可以研究基因和蛋白表達(dá)差異,、致病機(jī)理、藥物篩選等生命科學(xué)的重大課題,。
四,、染色體/精子分析分選
MoFlo/ MoFlo XDP高精度信號(hào)分辨能力(液流穩(wěn)定、激光/電子系統(tǒng)/PMT噪音低/運(yùn)算速度快)和高活性收獲細(xì)胞(系統(tǒng)清潔度好)的功能在染色體和精子分選中得到的表現(xiàn),。對(duì)牛精子分選進(jìn)行人工授精生產(chǎn)小奶牛在畜牧業(yè)上有很大的經(jīng)濟(jì)效益,,MoFlo/ MoFlo XDP是可以進(jìn)行這個(gè)應(yīng)用的分選流式細(xì)胞儀,在國(guó)內(nèi)有30臺(tái)MoFlo在日夜運(yùn)轉(zhuǎn)進(jìn)行商業(yè)分選,。
不同染色體之間的DNA含量差異很小,,普通的DNA染料無(wú)法區(qū)分23對(duì)染色體。利用高功率355nm紫外激光激發(fā)的HOECHST 33258和高功率458nm激光激發(fā)的CA3分別對(duì)染色體的DNA進(jìn)行染色,。不同的染色體因其G-C/A-T堿基對(duì)的比例不同而被分離開(kāi),,選中任何一條染色體設(shè)門(mén)后即可進(jìn)行高純度分選。染色體分析分選可以應(yīng)用在高精度FISH,、染色體移位,、基因定位、染色體序列測(cè)定,、染色體相關(guān)蛋白分析等。