細(xì)胞培養(yǎng)：

細(xì)胞培養(yǎng)是指體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度,，營養(yǎng)等）,，然后加上一些處理條件，比如做藥物篩選,，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選,，比如還可以測定某個基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物，這個當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦,，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多,，歡迎大家在后臺留言。

細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足,，長得太密,，代謝廢物太多,，要洗洗，同時也要分離出一部分細(xì)胞,，要加入新的培養(yǎng)液）換液（生存空間和營養(yǎng)剩余,，但是代謝廢物太多，要洗洗,，要吃飯,，才能長好，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基）凍存（太多了,，先存起來,，液氮里面里就是低溫，保存能量,，活得久）

復(fù)蘇（解凍,，恢復(fù)吃飯的能力，恢復(fù)生長）

胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個步驟的意義和目的）：

01細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：

試劑：PBS（PBS緩沖液）,，胰酶,，含血清的培養(yǎng)基；

流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多,，太多（80%~90%）會導(dǎo)致代謝廢物很多,，先吸掉廢液，再用PBS洗一洗,，同時太多會導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起,，這時候就需要加點胰酶消除它們之間的粘性，是否消除完,，在顯微鏡下看一看,，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基，中和一下胰酶,，這叫吹打,，除此之外，細(xì)胞太多了,，把一部分細(xì)胞移出來,，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng)，這叫傳代,。

02細(xì)胞換液：

試劑：PBS,，含血清的培養(yǎng)基；

流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液）,，再用PBS洗一洗,，由于細(xì)胞長得不是很多，細(xì)胞之間沒有黏在一起，因此不需要加入胰酶來消除它們之間的粘性,。由于細(xì)胞要吃飯,，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng),。

03細(xì)胞凍存：

試劑：凍存液,，PBS，胰酶,，含血清的培養(yǎng)基,；

流程：要凍存，先配置凍存液,，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時,，細(xì)胞內(nèi)液會形成冰晶，滲透壓會發(fā)生改變,，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂,，會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷。凍存液制備時,，一般需與血清一起配置：因為兩者互融時,，會散發(fā)熱量，所以凍存液需提前制備,。

因為細(xì)胞太多了,，需要凍存,，所以要先看一看,，吸一吸，洗一洗,，分一分,，中和一下，吹打制成細(xì)胞懸液,，離心,，吸掉上清液，加入凍存液,，輕輕吹吸均勻,，每管等量1ml裝入凍存管，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,，最后放入液氮罐,。

04細(xì)胞復(fù)蘇：

試劑：含血清的培養(yǎng)基；

流程：從液氮中取出凍存管,，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中,，解凍時，邊晃動邊觀察，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時,，即可從水浴鍋中取出,，打開凍存管，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中,，輕輕混勻,，1000r/min,離心五分鐘，吸掉上清液,，沉淀中加入適量培養(yǎng)液,，放入孵箱中，培養(yǎng),。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞,，需要在24小時后，換一次培養(yǎng)液