細(xì)胞培養(yǎng)：

細(xì)胞培養(yǎng)是指體外模擬體內(nèi)需要的生長條件（溫度,，營養(yǎng)等），然后加上一些處理?xiàng)l件,，比如做藥物篩選,，就可以做抗性基因的表達(dá)的篩選，比如還可以測定某個(gè)基因敲低或是過表達(dá)的產(chǎn)物,，這個(gè)當(dāng)然要結(jié)合WB來看最后基因的表達(dá)產(chǎn)物是否升高哦,，細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用還有很多，歡迎大家在后臺留言,。

細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理：細(xì)胞傳代（生存空間和營養(yǎng)不足,，長得太密，代謝廢物太多,，要洗洗,，同時(shí)也要分離出一部分細(xì)胞，要加入新的培養(yǎng)液）換液（生存空間和營養(yǎng)剩余，但是代謝廢物太多,，要洗洗,，要吃飯，才能長好,，所以要洗和加入新鮮培養(yǎng)基）凍存（太多了,，先存起來，液氮里面里就是低溫,，保存能量,，活得久）

復(fù)蘇（解凍，恢復(fù)吃飯的能力,，恢復(fù)生長）

胞培養(yǎng)的基本步驟（一定要明白每個(gè)步驟的意義和目的）：

01細(xì)胞傳代（貼壁細(xì)胞）：

試劑：PBS（PBS緩沖液）,，胰酶，含血清的培養(yǎng)基,；

流程：顯微鏡下看一看培養(yǎng)皿里的細(xì)胞多不多,，太多（80%~90%）會導(dǎo)致代謝廢物很多，先吸掉廢液,，再用PBS洗一洗,，同時(shí)太多會導(dǎo)致細(xì)胞黏在一起，這時(shí)候就需要加點(diǎn)胰酶消除它們之間的粘性,，是否消除完,，在顯微鏡下看一看，看完加入適宜的含血清的培養(yǎng)基,，中和一下胰酶,，這叫吹打，除此之外,，細(xì)胞太多了,，把一部分細(xì)胞移出來，加入適量的培養(yǎng)基放入孵箱繼續(xù)培養(yǎng),，這叫傳代,。

02細(xì)胞換液：

試劑：PBS，含血清的培養(yǎng)基,；

流程：先吸掉代謝廢物（即細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)液）,，再用PBS洗一洗，由于細(xì)胞長得不是很多,，細(xì)胞之間沒有黏在一起,，因此不需要加入胰酶來消除它們之間的粘性。由于細(xì)胞要吃飯,，加入新鮮的含血清的培養(yǎng)基,，最后放到孵箱里面進(jìn)行培養(yǎng),。

03細(xì)胞凍存：

試劑：凍存液,，PBS,，胰酶，含血清的培養(yǎng)基,；

流程：要凍存,，先配置凍存液，凍存液包含了：DMSO：防止在低溫（零度以下至-196℃）保存細(xì)胞時(shí),，細(xì)胞內(nèi)液會形成冰晶,，滲透壓會發(fā)生改變，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會出現(xiàn)紊亂,，會導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)損傷,。凍存液制備時(shí)，一般需與血清一起配置：因?yàn)閮烧呋ト跁r(shí),，會散發(fā)熱量,，所以凍存液需提前制備。

因為細(xì)胞太多了,，需要凍存,，所以要先看一看，吸一吸,，洗一洗,，分一分，中和一下,，吹打制成細(xì)胞懸液,，離心，吸掉上清液,，加入凍存液,，輕輕吹吸均勻，每管等量1ml裝入凍存管,，4℃20min,-20℃30min,-80℃過夜,，最后放入液氮罐。

04細(xì)胞復(fù)蘇：

試劑：含血清的培養(yǎng)基,；

流程：從液氮中取出凍存管,，迅速（小于3min）置于37℃水浴鍋中，解凍時(shí),，邊晃動邊觀察,，當(dāng)看到只有一小塊冰存在時(shí)，即可從水浴鍋中取出,，打開凍存管,，迅速將細(xì)胞懸液吸到離心管中,，輕輕混勻，1000r/min,離心五分鐘,，吸掉上清液,，沉淀中加入適量培養(yǎng)液，放入孵箱中,，培養(yǎng),。還有就是：復(fù)蘇的細(xì)胞，需要在24小時(shí)后,，換一次培養(yǎng)液